[发明专利]筛选高亲和力抗体的方法

摘要

本发明报告了用于生产抗体的方法，包括步骤：a)提供多个杂交瘤细胞，每种细胞都表达抗体，b)在不同的温度和不同的抗体浓度下，通过表面等离振子共振确定所述抗体与各抗原结合的时间依赖量，c)基于等式(II)至(XIII)，用b)中确定的时间依赖量至少计算热力学参数(i)标准缔合结合熵式(A)，(ii)标准解离结合熵式(B)，(iii)标准结合熵(ΔS°)，(iv)自由标准结合焓(ΔG°)，(v)标准解离自由结合焓式(C)，(vi)标准缔合自由结合焓式(D)，(vii)-TΔS°，(viii)解离速率常数kd，(ix)平衡结合常数KD，和(x)缔合速率常数Ka，d)选择生产这样的抗体的杂交瘤细胞，所述抗体具有至少两种下列的：i)低于10J/K＊mol的标准缔合结合熵，ii)100J/mol＊K或更高的绝对标准解离结合熵，iii)100J/mol＊K或更高的绝对标准结合熵，e)在适合所述抗体表达的条件下，通过培养所述选定的细胞生产抗体，并从细胞或/和培养基中回收所述抗体。

主权项

从多个抗体中选择抗体的方法，所述方法包括下列步骤：‑基于抗原的分子量优化表面等离振子共振测定中的信号应答，从而在测定的温度范围内保持Rmax值恒定，‑实施动力学筛选步骤，包括基于表面等离振子共振测定根据通式(I)计算抗原复合体稳定性(I)抗原复合体稳定性＝(1‑[BL(RU)‑SL(RU)/BL(RU)])BL表示设置在抗原注射终点不久前的结合晚期参照点，SL表示设置在复合体解离期终点不久前的稳定性晚期参照点，‑选择具有大于95％复合体稳定性的抗体，‑在17℃、21℃、25℃、29℃、33℃和37℃，通过表面等离振子共振确定温度依赖性动力学数据，‑基于等式(II)至(XIII)，计算过渡态热力学性质，‑基于温度依赖性增加的抗原复合体缔合速率常数Ka[1/Ms]，以及保持的或降低的抗原复合体解离速率常数kd[1/s]选择抗体。