[发明专利]筛选高亲和力抗体的方法

权利要求书

1.从多个抗体中选择抗体的方法，所述方法包括下列步骤：

-基于抗原的分子量优化表面等离振子共振测定中的信号应答，从而在测定的温度范围内保持R_max值恒定，

-实施动力学筛选步骤，包括基于表面等离振子共振测定根据通式(I)计算抗原复合体稳定性

(I)抗原复合体稳定性＝(1-[BL(RU)-SL(RU)/BL(RU)])

BL表示设置在抗原注射终点不久前的结合晚期参照点，SL表示设置在复合体解离期终点不久前的稳定性晚期参照点，

-选择具有大于95％复合体稳定性的抗体，

-在17℃、21℃、25℃、29℃、33℃和37℃，通过表面等离振子共振确定温度依赖性动力学数据，

-基于等式(II)至(XIII)，计算过渡态热力学性质，

-基于温度依赖性增加的抗原复合体缔合速率常数K_a[1/Ms]，以及保持的或降低的抗原复合体解离速率常数k_d[1/s]选择抗体。

2.权利要求1的方法，特征是

-所述热力学性质是焓驱动的抗原复合体缔合期和低于10J/K＊mol的结合熵和/或

-用解离期选择抗体，所述解离期表现出负的或接近零的解离活化能(Eadiss[kJ/mol])、负的解离焓([kJ/mol])和大的负解离熵([kJ/mol])。

3.用于从多个抗体中选择温度不依赖性抗原结合抗体的方法，例如，用于治疗性处理，其中用低于10J/K＊mol的标准缔合结合熵选择抗体。

4.权利要求3的方法，特征是用至少下列2种选择抗体：

a)低于10J/K＊mol的标准缔合结合熵

b)100J/mol＊K或更高的绝对标准解离结合熵

c)100J/mol＊K或更高的绝对标准结合熵(ΔS°)。

5.权利要求3或4的方法，特征是标准缔合结合熵低于5J/K＊mol。

6.权利要求3-5的任一项的方法，特征是标准缔合结合熵低于0J/K＊mol。

7.权利要求3-6的任一项的方法，特征是绝对标准解离结合熵是125J/mol＊K或更高。

8.权利要求3-7的任一项的方法，特征是绝对标准解离结合熵是150J/mol＊K或更高。

9.权利要求3-8的任一项的方法，特征是绝对标准结合熵(ΔS°)是125J/mol＊K或更高。

10.权利要求3-9的任一项的方法，特征是绝对标准结合熵(ΔS°)是150J/mol＊K或更高。

11.权利要求3-10的任一项的方法，特征是用-50kJ/mol或更低的自由标准结合焓(ΔG°)选择抗体。

12.权利要求3-11的任一项的方法，特征是用标准解离自由结合焓与标准缔合自由结合焓大于2.3的比例来选择抗体。

13.权利要求3-12的任一项的方法，特征是用以下的-TΔS°值选择抗体：

a)-80kJ/mol或更低，或

b)+40kJ/mol或更高。

14.用于从多个抗体中选择温度不依赖性抗原结合抗体的方法，包括用随着温度增加而保持在相同数量级，或降低至多两个数量级的解离速率常数k_d(1/s)选择抗体的步骤。

15.用于从多个抗体中选择温度不依赖性抗原结合抗体的方法，包括用随着温度增加而保持恒定或降低的平衡结合常数k_D(M)选择抗体的步骤。

16.权利要求3-15的任一项的方法，特征是温度范围从13℃至37℃。

17.用于从多个抗体中选择温度不依赖性抗原结合抗体的方法，包括步骤：

i)确定温度-依赖性动力学数据，

ii)计算过渡态(TS)热力学性质，和

iii)基于热力学行为选择抗体。

18.权利要求17的方法，特征是所述热力学行为是温度依赖性增加的抗原复合体缔合速率常数k_a[1/Ms]，和保持的或降低的抗原复合体解离速率常数k_d[1/s]。