[发明专利]一种蚓激酶制备工艺方法

摘要

本发明公开了一种蚓激酶制备工艺方法，其包括磨浆、除渣、盐析、离心、超滤、柱层析分离、超滤、除菌、喷干等步骤。本发明提供的蚓激酶制备工艺方法是在将蚯蚓匀浆时加入乙醇作为助剂通过物理沉降、超滤去除杂蛋白，然后再上柱子层析纯化，这样减少柱子的负载量，从而提高了蚓激酶的收率、降低了其制备成本，减少了产生需处理的废液、大大提高了生产能力。本发明提供的蚓激酶生产工艺方法，具有生产工艺质量可控性和稳定性好等特点。

主权项

一种蚓激酶生产工艺方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)鲜蚓清洗在筐中或地面上将蚯蚓上部泥土层层除去，把蚯蚓铺成薄层，光照10～18小时，让蚯蚓排出污物，用自来水在槽中冲洗二遍，洗去泥和粘浮物，用塑料桶装盛，贮存于冷库中备用；(二)磨浆用胶体磨将蚯蚓磨成浆液，蚯蚓与按(V/V)1∶3～5的比例加入低浓度乙醇的pH5.0～5.3的柠檬酸钠制成匀浆；(三)除渣用沉降离心机将料液中的粗渣去除，制得上清液；(四)盐析上清液中按30％饱和浓度加入硫酸铵，搅拌完全溶解后静置1小时；(五)离心用立式高速离心机经高速离心将料液中细渣去除，制得清液；(六)超滤取上清液用50,000dt膜超滤，得超滤液；(七)柱层析分离将超滤液用泵送到下料桶，混合上样，上样完毕，用洗涤液，洗至流出液呈淡黄色，pH7.0～8.0，略呈碱性，再用洗脱液洗脱，洗脱液变混浊，颜色由黄变红，流出液电导率比洗脱液电导率略高时开始收集，洗脱至料液变清，颜色呈淡橙色，电导率达到洗脱液电导率(不小于9000μs/cm)为止；(八)超滤将收集液倒入贮罐内，开泵，调转速21×12rpm，调节压力不大于0.1Mpa，浓缩至1/15，收集料液澄清，澄清完再上柱加去离子水脱盐，至浓缩液呈中性(pH＝7.0)最后浓缩至1/(16～20)；(九)过滤、除菌用澄清型、除菌型液净滤板过滤3遍，至滤液澄清，在30万级用0.22um微孔滤膜进行灭菌过滤；(十)喷干在干燥塔中，使出口温度控制在80～86℃干燥料液，收集酶粉。