[发明专利]一种蚓激酶制备工艺方法

权利要求书

1.一种蚓激酶生产工艺方法，其特征在于，包括以下步骤：

(一)鲜蚓清洗

在筐中或地面上将蚯蚓上部泥土层除去，把蚯蚓铺成薄层，光照10～18小时，让 蚯蚓排出污物，用自来水在槽中冲洗二遍，洗去泥和粘浮物，用塑料桶装盛，贮存于冷 库中备用；

(二)磨浆

用胶体磨将蚯蚓磨成浆液，蚯蚓与按1∶3～5的V/V比例加入低浓度乙醇的pH5.0～ 5.3的柠檬酸钠制成匀浆；其中，低浓度乙醇的浓度范围为10％～20％；

(三)除渣

用沉降离心机将料液中的粗渣去除，制得上清液；

(四)盐析

上清液中按30％饱和浓度加入硫酸铵，搅拌完全溶解后静置1小时；

(五)离心

用立式高速离心机经高速离心将步骤(四)的料液中细渣去除，制得清液；

(六)超滤

取步骤(五)的清液用50,000dt膜超滤，得超滤液；

(七)柱层析分离

将超滤液用泵送到下料桶，混合上样，上样完毕，用洗涤液，洗至流出液呈淡黄 色，pH7.0～8.0，略呈碱性，再用洗脱液洗脱，洗脱液变混浊，颜色由黄变红，流出液 电导率比洗脱液电导率略高时开始收集，洗脱至料液变清，颜色呈淡橙色，电导率达 到不小于9000μs/cm的洗脱液电导率为止；

其中：柱层析的层析柱为疏水层析柱，洗涤液为PH值7.0～8.0的硫酸铵-磷酸盐缓 冲液，洗脱液为PH值7.0～8.0的磷酸盐缓冲液；

(八)超滤

将收集液倒入贮罐内，开泵，调转速21×12rpm，调节压力不大于0.1Mpa，浓缩至 1/15，收集料液澄清，澄清完再上柱加去离子水脱盐，至浓缩液呈中性最后浓缩至 1/(16～20)；

(九)过滤、除菌

用澄清型、除菌型液净滤板过滤3遍，至滤液澄清，在30万级用0.22um微孔滤膜 进行灭菌过滤；

(十)喷干

在干燥塔中，使出口温度控制在80～86℃干燥料液，收集酶粉。