[发明专利]一种乳酸链球菌素修饰的磁性纳米粒子的制备方法及应用

摘要

一种乳酸链球菌素修饰的磁性纳米粒子的制备方法，提供了Fe3O4磁性纳米粒子制备及溶胶凝胶功能化条件，步骤如下：制备超顺磁性Fe3O4磁性纳米粒子；Fe3O4磁性纳米粒子的硅烷功能化；制备Nisin功能化磁性磁性纳米粒子。本发明的优点：Nisin功能化磁性磁性纳米粒子应用于微生物测定时，化学稳定性高、生物相容性好，其粒径可使表面容纳多个配体存在，与细菌进行多化合价作用，使得生物纳米粒子具有很好的动力学；特别是Nisin和细菌的特异性作用及静电吸附作用都促进对细菌的捕捉。本方法工艺合理、易于实施且能够快速、灵敏地检测出致病菌，对于食品安全、临床诊断、治疗及反生物恐怖等方面具有重要的意义。

主权项

一种乳酸链球菌素修饰的磁性纳米粒子的制备方法，提供了Fe3O4磁性纳米粒子制备条件及溶胶凝胶功能化条件，其特征在于包括如下步骤：(1)超顺磁性Fe3O4磁性纳米粒子的制备采用共沉淀方法合成Fe3O4磁性纳米粒子：将FeCl3·6H2O和FeSO4·7H2O分别溶于HCl溶液中，浓度均为1M，将两种溶液进行机械搅拌混合，通入氮气保护，加入氨水，使溶液pH达到11，在室温下剧烈搅拌30min，以钕铁硼磁铁进行磁分离，分别用高纯水、无水乙醇依次清洗各3次，60℃真空干燥12h；(2)Fe3O4磁性纳米粒子的硅烷功能化1)Fe3O4磁性纳米粒子包覆四乙氧基硅烷(TEOS)将真空干燥后的Fe3O4磁性纳米粒子分散于乙醇和水的体积比为1～50∶1的乙醇水溶液中，超声混合，调节溶液的pH值为9，加入四乙氧基硅烷(TEOS)，机械搅拌并氮气保护，室温反应(4～24)h，然后以钕铁硼磁铁进行磁分离，无水乙醇清洗6次，60℃真空干燥12h；2)硅包覆的Fe3O4磁性纳米粒子的氨基功能化将真空干燥后的硅包覆的Fe3O4磁性纳米粒子分散混合有机溶液中，超声混合，加入γ-氨丙基-三乙氧基硅烷(APTES)混合均匀，在容器中机械搅拌并氮气保护，室温24h，最后以钕铁硼磁铁分离，无水乙醇清洗6次，60℃真空干燥12h；3)氨基功能化的Fe3O4磁性纳米粒子的羧基功能化将真空干燥后的氨基功能化的Fe3O4磁性纳米粒子分散于无水甲苯中，加入戊二酸酐，机械搅拌并氮气保护，室温反应(2～8)h，最后以钕铁硼磁铁分离，无水乙醇清洗6次，60℃真空干燥12h；(3)乳酸链球菌素(Nisin)功能化磁性磁性纳米粒子的制备将羧基功能化的Fe3O4磁性纳米粒子分散于pH为5.0～8.0的磷酸缓冲溶液中，加入EDC.HCl和NHS，室温反应30min，以以钕铁硼磁铁分离，高纯水清洗磁球3次，在这过程中以钕铁硼磁铁富集，最后将其重新分散于pH为5.0～8.0的磷酸缓冲溶液中，加入乳酸链球菌素(Nisin)，室温反应(1～4h)，以钕铁硼磁铁分离后富集，用磷酸缓冲溶液清洗3次即可得到Nisin修饰的Fe304磁性纳米粒子。