[发明专利]一种乳酸链球菌素修饰的磁性纳米粒子的制备方法及应用

权利要求书

1.一种乳酸链球菌素修饰的磁性纳米粒子的制备方法，提供了Fe₃O₄磁性纳 米粒子制备条件及溶胶凝胶功能化条件，其特征在于包括如下步骤：

(1)超顺磁性Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备

采用共沉淀方法合成Fe₃O₄磁性纳米粒子：将FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O 分别溶于2M HCl溶液中，使两者的浓度均为1M，将FeCl₃·6H₂O和FeSO₄·7H₂O 以2∶1的摩尔比进行机械搅拌混合，通入氮气保护，加入氨水，使溶液pH达 到11，在室温下剧烈搅拌30min，以钕铁硼磁铁进行磁分离，分别用高纯水、无 水乙醇依次清洗各3次，60℃真空干燥12h；

(2)Fe₃O₄磁性纳米粒子的硅烷功能化

1)Fe₃O₄磁性纳米粒子包覆四乙氧基硅烷(TEOS)

将真空干燥后的Fe₃O₄磁性纳米粒子0.1g分散于50mL乙醇和水的体积比 为4∶1的乙醇水溶液中，超声混合，调节溶液的pH值为9，加入0.1mL四乙 氧基硅烷(TEOS)，机械搅拌并氮气保护，室温反应12h，然后以钕铁硼磁铁进 行磁分离，无水乙醇清洗6次，60℃真空干燥12h；

2)硅包覆的Fe₃O₄磁性纳米粒子的氨基功能化

将真空干燥后的硅包覆的Fe₃O₄磁性纳米粒子0.1g分散于50mL N，N，-二甲 基甲酰胺和甲苯的体积比为5∶2的混合有机溶液中，超声混合，加入1mLγ- 氨丙基-三乙氧基硅烷(APTES)混合均匀，在容器中机械搅拌并氮气保护，加 热60℃反应12h，最后以钕铁硼磁铁分离，无水乙醇清洗6次，60℃真空干燥 12h；

3)氨基功能化的Fe₃O₄磁性纳米粒子的羧基功能化

将真空干燥后的氨基功能化的Fe₃O₄磁性纳米粒子0.1g超声分散于100mL 无水甲苯中，加入0.5g戊二酸酐，机械搅拌并氮气保护，室温反应4h，最后以 钕铁硼磁铁分离，无水乙醇清洗6次，60℃真空干燥12h；

(3)乳酸链球菌素(Nisin)功能化磁性纳米粒子的制备

将羧基功能化的Fe₃O₄磁性纳米粒子20mg分散于50mL pH为7.0的磷酸 缓冲溶液中，加入33mg的EDC·HCl和20mg NHS，室温反应30min，高纯水 清洗3次，在这过程中以钕铁硼磁铁富集，最后将其重新分散于50mL pH为5.0～ 8.0的磷酸缓冲溶液中，加入40mg乳酸链球菌素(Nisin)，室温反应3h，以钕 铁硼磁铁分离后富集，用磷酸缓冲溶液清洗3次即可得到Nisin修饰的Fe₃O₄磁 性纳米粒子。

2.一种所述乳酸链球菌素修饰的磁性纳米粒子的应用，用于农产品中致病微 生物的检测，其特征在于具体步骤如下：农产品经匀浆处理并以pH5.8～7.4缓 冲液稀释或是直接以pH5.8～7.4缓冲液淋洗并收集，取匀浆稀释液或淋洗液与 Nisin修饰的磁性纳米粒子振荡吸附，将Nisin修饰的磁性纳米粒子和细菌的结合 物以无菌生理盐水清洗3次，在此过程中以外部磁铁进行富集，将其进行荧光染 色，以荧光显微镜进行检测。

3.根据权利要求2所述乳酸链球菌素修饰的磁性纳米粒子的应用，其特征在 于：所述pH5.8～7.4缓冲液中含有重量百分比浓度为0.9％的NaCl。