[发明专利]一种质粒DNA/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架的制备方法

摘要

本发明公开的质粒DNA/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架的制备方法，步骤如下：将季铵化壳聚糖溶液与质粒DNA溶液等比混合均匀，制备得到质粒DNA复合粒子；将纤维蛋白原溶解于生理盐水中配制成纤维蛋白原溶液；将凝血酶溶解于氯化钙溶液中配制成凝血酶氯化钙溶液；将聚合物多孔支架用乙醇灭菌处理；将等体积的质粒DNA复合粒子、纤维蛋白原溶液和凝血酶氯化钙溶液利用负压同时填充到聚合物多孔支架中，置于恒温烘箱，使纤维蛋白原完全凝胶，即可。本发明制备方法简便、材料来源广泛，能够模拟人体天然软骨的组成和结构，本发明的复合支架具有良好的力学性能和生物活性，能加速软骨、骨组织的修复，具有很强的软骨、骨修复的应用价值。

主权项

一种质粒DNA/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架的制备方法，其步骤如下：1)将季铵化的壳聚糖溶解在磷酸盐缓冲液中，配制成1-10mg/mL的季铵化壳聚糖溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌；质粒DNA配成100-1000μg/mL的水溶液；将质粒DNA水溶液与季铵化壳聚糖溶液等体积混合，剧烈震荡混合均匀，静置，制备得到质粒DNA复合粒子；2)将纤维蛋白原溶解于生理盐水中，配制成浓度为10-80mg/mL的纤维蛋白原溶液；将凝血酶溶解于氯化钙溶液中，配制成浓度为10-20U/mL的凝血酶氯化钙溶液；3)将聚合物多孔支架浸入到乙醇中，采用先抽真空，后恢复压力的方法，将乙醇导入到聚合物多孔支架中；将导入乙醇的支架浸入到三次蒸馏水中，反复进行先抽真空，后恢复压力的方法，将乙醇置换成水，直至无乙醇残留；4)将等体积的质粒DNA复合粒子、纤维蛋白原溶液和凝血酶氯化钙溶液利用负压同时填充到聚合物多孔支架中，将支架置于恒温烘箱中孵育，使纤维蛋白原完全凝固形成水凝胶，即获得质粒DNA/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架。