[发明专利]一种质粒DNA/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架的制备方法

权利要求书

1.一种质粒DNA/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架的制备方法，其步骤如 下：

1)将季铵化的壳聚糖溶解在磷酸盐缓冲液中，配制成1-10mg/mL的季铵化 壳聚糖溶液，经0.22μm滤膜过滤除菌；质粒DNA配成100-1000μg/mL的水 溶液；将质粒DNA水溶液与季铵化壳聚糖溶液等体积混合，剧烈震荡混合均匀， 静置，制备得到质粒DNA复合粒子；

2)将纤维蛋白原溶解于生理盐水中，配制成浓度为10-80mg/mL的纤维蛋 白原溶液；将凝血酶溶解于氯化钙溶液中，配制成浓度为10-20U/mL的凝血酶 氯化钙溶液；

3)将聚合物多孔支架浸入到乙醇中，采用先抽真空，后恢复压力的方法， 将乙醇导入到聚合物多孔支架中；将导入乙醇的支架浸入到三次蒸馏水中，反 复进行先抽真空，后恢复压力的方法，将乙醇置换成水，直至无乙醇残留；

4)将等体积的质粒DNA复合粒子、骨髓间充质干细胞、纤维蛋白原溶液 和凝血酶氯化钙溶液利用负压同时填充到聚合物多孔支架中，然后将支架置于 恒温烘箱中孵育，使纤维蛋白原完全凝固形成水凝胶，即获得质粒DNA/纤维蛋 白凝胶/聚合物三元复合支架；上述的质粒DNA是能够表达转化生长因子β1、 骨形成蛋白或胰岛素样生长因子的质粒DNA。

2.按权利要求1所述的质粒DNA/纤维蛋白凝胶/聚合物三元复合支架的制 备方法，其特征在于所说的聚合物多孔支架是聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸共聚物、 聚氨酯或胶原多孔支架。