[发明专利]珍珠贝外套膜组织的离体培养方法及培养基

摘要

本发明公开了一种珍珠贝外套膜组织的离体培养方法及其专用培养液，该培养基包括水解珍珠液、贝液、抗生素和海水，常规从珠母贝取材获得外套膜上皮组织，除去裙带部分，净化处理后切成约1mm³～2mm³大小的组织块，置于蛋白酶溶液中，消化后加入上述培养液中止消化。将经初步消化的组织块分别置于培养皿中或贴附于已涂抹贴壁物质的珠核上，通过该方法培养的珍珠贝外套膜组织生长状况良好，4h细胞从组织块中迁出，2d后有效地形成体外珍珠囊。该方法可以在插入珍珠核的珠贝中选取不同位置注入无核珍珠囊培养无核珍珠，成本低，成活率及成珠率高，对珠母贝损伤少。

主权项

1、一种珍珠贝外套膜组织的离体培养方法，其特征在于：(1)准备培养皿，采用陶瓷或玻璃容器作为培养皿，培养皿的底面用自制的从贝闭壳肌或外套膜组织提取的贴壁物质预先处理，该贴壁物质从贝闭壳肌或外套膜提取后干燥消毒，待用；(2)体外珍珠囊的培养，常规取材获得珍珠贝外套膜上皮组织，除去裙带部分，净化处理后切成约1mm3～2mm3大小的组织块，置0.1-0.8％的蛋白酶溶液，过滤除菌，4℃储存备用，在摄氏20℃-25℃的温度下消化5～10min后加入培养液中止消化，将经初步消化的组织块分别置于35mm×10mm培养皿中，或贴附于已涂抹贴壁物质的珠核上，每个培养皿底部贴若干块组织块，摆放组织块后，向培养皿内加入少量的培养液，盖好瓶盖，置于20℃培养箱中进行培养，24h后补加一次培养基，隔天或视细胞生长状况换液；(3)珍珠囊移植与珍珠的养殖，以弯头吸管将珍珠囊移植于育珠贝体内，或与珠核一同移植育珠贝体内，休养期过后将手术贝放置于温度范围为15-30℃海水中吊养9-12个月，能取得较高的成活率及成珠率，获得高质量的无核珍珠或有核珍珠。