[发明专利]珍珠贝外套膜组织的离体培养方法及培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种水生无脊椎动物的组织培养技术及应用领域，特别是珍珠贝外套膜组织 的离体培养方法及培养基。

背景技术

珍珠是由珍珠贝体内的珍珠囊分泌珍珠质而形成的，珍珠囊是珍珠贝外套膜的上皮细胞 受到刺激后增殖形成的，因此珍珠贝的外套膜在珍珠形成中起着重要的作用。现代人工珍珠 培养方法是将供体珍珠贝外套膜组织块单独或与珠核一道植入受体珍珠贝体内形成无核珍珠 或有核珍珠。在插植手术过程中，上皮细胞贴附于珠核的位置、紧密程度、组织块的面积、 形状及取材的位置、植核位置、植核手术时对育珠贝的机械损伤程度都直接关系到珍珠囊的 形成和上皮细胞的分泌状态，常引起各种疵珠的产生，如污珠、尾巴珠、素珠等。此外，外 套膜植片法还会使育珠贝损伤严重，增加植核后育珠贝的死亡率和吐核率，从而严重地影响 珍珠的质量和产量。由于外套膜植片法固有的缺陷，学者们根据珍珠形成的原理，利用组织 培养技术及细胞培养技术、体外培育有核珍珠囊，再进行插囊育珠，试图建立一种新的珍珠 培育方法。

对于珍珠贝外套膜的组织培养国内外已开展了不少工作，日本学者町井昭(Machii)从 20世纪60年代末期就对日本产的马氏珠母贝外套膜组织培养进行了系统的研究，使培养的 外套膜组织在体外存活30d左右并能分泌微型颗粒的珍珠质，我国四川大学的石安静等从80 年代初期对我国的淡水珍珠蚌、三角帆蚌、褶纹冠蚌和背角无齿蚌的外套膜组织培养进行深 入的研究，不但成功地建立组织培养技术和方法，而且对外套膜组织在体外培养中产生的分 泌物(珍珠质)的性质进行了分析。学者们既往遇到的一个共同难题是，外套膜细胞培养难 以形成细胞系，后续工作无法开展[喻达辉，苏天凤.生物技术在珍珠养殖业中的应用.水产科 技，2000，(1)：13]。

本发明人认为，目前对珍珠贝类的生理、生化研究薄弱，尤其是对珍珠贝类的免疫机制 尚不清楚，在实验室中直接培养出真正意义的珍珠是困难的，但采取组织培养或细胞培养的 方法，帮助外套膜上皮细胞尽快与珠母贝建立血液循环关系，加速珍珠囊的形成；减少细胞、 组织块及珠核植入过程对珠母贝造成的伤害，不但对提高海水有核珍珠的成珠率是有帮助的， 而且，在海水无核珍珠(主要为药用)的生产中有特别重要的意义，也较容易在生产中得到 推广。

广西海洋研究所王爱民等同志从20世纪90年代初对体外培养有核珍珠囊进行研究，研 究得出一个共同的结果是：用外套膜细胞培养形成的体外珍珠囊用于插囊育珠无法得到珍珠， 而将外套膜组织块培养形成的体外珍珠囊用于插囊育珠能够得到珍珠。说明，细胞培养悬液 所形成的珍珠囊还不是完善的珍珠囊，而由外套膜组织培养形成的珍珠囊才具有完整的结构 和功能。在体外培养珍珠囊最重要的是建立完整的珍珠囊结构。由于目前尚无法精确地分离 外套膜组织中的各类细胞，特别是外上皮细胞、内上皮细胞和结缔组织细胞三类细胞，因此 无法按比例在体外建立珍珠囊。其结果是虽然有不少细胞粘附在珠核上，但细胞之间无法建 立应有的连接，故单纯的细胞培养法不能形成结构完整的体外珍珠囊。相反，用外套膜组织 块贴附在珠核上进行培养，外套膜组织建立体外珍珠囊的过程同体内建立珍珠囊的过程基本 上是一致的，外上皮细胞从外套膜组织块中迁出，沿着珠核的表面移动，逐渐包裹珠核表面， 同时外套膜组织中的结缔组织细胞再包裹在外上皮细胞表面，最终形成结构较完整的珍珠囊， 这种珍珠囊是真正意义上的珍珠囊。

但是用外套膜组织块形成的体外珍珠囊用于插囊育珠实验出现成珠率低、素珠多和育珠 贝死亡率高的情况，这同插核技术无不相关，这是因为切口的大小及珠核通过切口运至预定 核位的方式直接影响到体外珍珠囊的结构变化。若体外珍珠囊在珠核上贴附不牢固、切口过 小，就会造成体外珍珠囊受到破坏，使它们在到达预定核位之前完全脱落，无法产生珍珠， 只能是素珠，而保持完整结构珍珠囊的珠核最终产生珍珠。王爱民等虽然对插入工艺进行了 改进，但插囊育珠技术应用于海水养殖，只是取得4.05％的成功率，要应用于生产，还有很多 基础工作要做(王爱民，阎冰，苏琼，等.马氏珠母贝珍珠囊体外培养及插囊育珠.广西科学， 2000，7(1)：70)。

发明内容

本发明的目的主要是针对以上技术的不足以及既往实验中反映出的问题，提供一种珍珠 贝外套膜组织的离体培养方法及培养基。