[发明专利]珍珠贝外套膜组织的离体培养方法及培养基

权利要求书

1.一种珍珠贝外套膜组织的离体培养方法，其特征在于：

(1)准备培养皿，采用陶瓷或玻璃容器作为培养皿，培养皿的底面用自制的从贝闭壳肌 或外套膜组织提取的贴壁物质预先处理，该贴壁物质从贝闭壳肌或外套膜提取后干燥消毒， 待用；

(2)体外珍珠囊的培养，常规取材获得珍珠贝外套膜上皮组织，除去裙带部分，净化处 理后切成1mm³～2mm³大小的组织块，置质量浓度0.1-0.8％、经过滤除菌、4℃储存备用的蛋 白酶溶液中，在摄氏20℃-25℃的温度下初步消化5～10min后加入培养液中止消化，再将经 初步消化的组织块分别置于35mm×10mm培养皿中，每个培养皿底部贴若干块组织块，摆放 组织块后，向培养皿内加入少量的所述培养液，盖好瓶盖，置于20℃培养箱中进行培养，24h 后补加一次所述培养液，隔天换液；

所述的培养液主要原料和质量份数如下：水解珍珠液：0.1-0.5份；贝液： 2-10份；抗生素：0.01-0.03份；天然海水：90-100份；所述的贝液是贝组织液或贝血清， 贝组织液是取珠贝体内的液体经过滤除菌得到，贝血清是从珍珠贝心脏或大血管中取血，经 离心，取上清液即为珍珠贝血清；

(3)珍珠囊移植与珍珠的养殖，以弯头吸管将珍珠囊移植于育珠贝体内，休养期过后将 所述育珠贝放置于温度范围为15-30℃海水中吊养9-12个月。

2.根据权利要求1所述的珍珠贝外套膜组织的离体培养方法，其特征在于：所述的蛋白 酶溶液是木瓜蛋白酶、胰蛋白酶或菠萝蛋白酶的商品酶，蛋白酶溶液的制备是按比例秤取蛋 白酶，溶解于重蒸馏水中配制成质量浓度0.1-0.8％的蛋白酶溶液，混匀，过滤除菌，4℃备 用。

3.根据权利要求1所述的珍珠贝外套膜组织的离体培养方法，其特征在于；水解珍珠液 是将洗净的珍珠母贝壳用醋酸浸泡，软化，经机械打磨，得到纯净的珍珠层片，经烘干、粉 碎、磨细，用硫酸加热水解，碳酸钙或石灰乳中和，真空浓缩，活性炭脱色除杂，得到珍珠 原液；或者是将珍珠质粉和pH2.5～6的蜂蜜按0.1～5∶100混合后在5℃以上室温搅拌得到。

4.根据权利要求1所述的珍珠贝外套膜组织的离体培养方法，其特征在于：所述的抗生 素是青霉素-链霉素双抗溶液，青霉素浓度为100IU/ml，链霉素浓度为0.1g/L。