[发明专利]一种降血压肽的制备方法

摘要

一种降血压肽的制备方法，涉及一种降血压肽。提供一种生产成本较低，便于进行规模化生产的降血压肽的制备方法。配制固体平板培养基，将冻存的大肠杆菌工程菌涂板后培养活化，再挑取单菌落接种入灭菌后种子培养基中，得工作种子液；将培养基倒入发酵罐中；灭菌后冷却，加入消泡剂，将工作种子液接种于发酵罐中，校正相对溶氧水平达100％；在发酵过程中，调节转速和通气量使DO维持在溶氧为10％～80％，培养后补料；乳糖诱导，加入乳糖至终浓度0.1％～2％，将发酵液离心，取沉淀，用1×PBS缓冲液清洗，收集菌体；将菌体超声破碎，离心，取上清液，即获得降血压肽。

主权项

1.一种降血压肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)工作种子液的制备：配制固体平板培养基，将冻存的大肠杆菌工程菌E.coliBL21/VLPVP涂板后培养活化，再挑取单菌落接种入灭菌后种子培养基中，摇床培养得活化菌种，即得工作种子液；2)接种前准备：洗净发酵罐，用pH7.0和pH10.01标准液校正发酵罐的pH计探头，然后将已配制好的经优化的培养基倒入发酵罐中，高压灭菌后冷却，高压过程中校正溶解氧DO为0％；3)接种，培养：灭菌结束待冷却到37℃后，在火焰圈的保护下加入消泡剂，以1％～6％的接种量将工作种子液接种于发酵罐中，培养温度为23～44℃，起始pH为6～7.5，校正相对溶氧水平达100％；4)补料：在发酵过程中，调节转速和通气量使DO维持在溶氧为10％～80％，培养1～4h后开始补料；5)乳糖诱导表达VLPVPR重组蛋白阶段：停止补料后，开始乳糖诱导，诱导的条件为诱导温度23～44℃，加入乳糖至终浓度0.1％～2％，诱导时间为5～8h；6)菌体收集：将步骤5)的发酵液离心，取沉淀，用1×PBS缓冲液清洗，收集菌体；7)获得降血压肽：将步骤6)制得的菌体超声破碎，离心，取上清液，即获得降血压肽；8)SDS-PAGE电泳检测GST融合蛋白表达量：取获得的降血压肽进行SDS-PAGE电泳，经染色和脱色后观察VLPVPR重组蛋白的表达情况。