[发明专利]一种降血压肽的制备方法

权利要求书

1.一种降血压肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)工作种子液的制备：配制固体平板培养基，将冻存的大肠杆菌工程菌E.coli  BL21/VLPVPR涂板后培养活化，再挑取单菌落接种入灭菌后种子培养基中，摇床培养得活化 菌种，即得工作种子液；所述固体平板培养基的配方为：酵母提取物10g/L，胰蛋白胨16g/L， 氯化钠5g/L，琼脂10g/L，pH为7.0，灭菌冷却后加入氨苄青霉素至终浓度为100mg/L；所 述种子培养基的配方为：酵母提取物10g/L，胰蛋白胨16g/L，氯化钠5g/L，pH为7.0，灭 菌冷却后加入氨苄青霉素至终浓度为100mg/L；

2)接种前准备：洗净发酵罐，用pH7.0和pH10.01标准液校正发酵罐的pH计探头，然 后将已配制好的经优化的培养基倒入发酵罐中，高压灭菌后冷却，高压过程中校正溶解氧DO 为0％；所述经优化的培养基，按质量百分比的含量为：酵母粉0.5％～3.5％，蛋白胨0.5％～ 3％，，葡萄糖0％～3％，NaCl 0.5％～3％，其余为水；

3)接种，培养：灭菌结束待冷却到37℃后，在火焰圈的保护下加入消泡剂，以1％～6％ 的接种量将工作种子液接种于发酵罐中，培养温度为23～44℃，起始pH为6～7.5，校正相 对溶氧水平达100％；

4)补料：在发酵过程中，调节转速和通气量使DO维持在溶氧为10％～80％，培养1～ 4h后开始补料；所述溶氧为40％，培养2h后开始补料，所述补料的速度为0.5～1.5mL/min， 补料的时间为0.5～2h；

5)乳糖诱导表达VLPVPR重组蛋白阶段：停止补料后，开始乳糖诱导，诱导的条件为 诱导温度23～44℃，加入乳糖至终浓度0.1％～2％，诱导时间为5～8h；

6)菌体收集：将步骤5)的发酵液离心，取沉淀，用1×PBS缓冲液清洗，收集菌体；

7)获得降血压肽：将步骤6)制得的菌体超声破碎，离心，取上清液，即获得降血压肽；

8)SDS-PAGE电泳检测GST融合蛋白表达量：取获得的降血压肽进行SDS-PAGE电 泳，经染色和脱色后观察VLPVPR重组蛋白的表达情况。

2.如权利要求1所述的一种降血压肽的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述培养 活化在37℃恒温培养箱活化18～24h。

3.如权利要求1所述的一种降血压肽的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述接种 量为2％，培养温度为37℃，起始pH为7.0。

4.如权利要求1所述的一种降血压肽的制备方法，其特征在于在步骤5)中，所述诱导 温度为37℃，加入乳糖至终浓度为2％，诱导时间为6h。

5.如权利要求1所述的一种降血压肽的制备方法，其特征在于在步骤7)中，所述离心 为12000r/min离心15min。