[发明专利]鉴别反刍动物源性成分的荧光PCR检测试剂及制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种能同时鉴别三种反刍动物品种的生物检测试剂，以及这种试剂的制备方法和应用。本发明是选择牛、山羊和绵羊特异和保守的线粒体基因保守序列片段为靶目标，应用Primer Express 3.0软件和DNAStar中的Primer Select软件，设计合成多组引物和探针。将设计的多对引物和探针合成和标记后进行最佳配对筛选实验，得到最适合的引物和探针组合。本发明所述的试剂包含两对特异性引物和三条Taq Man探针，其中，一对引物针对牛源性成分，另一对是针对山羊和绵羊源性成分检测的通用引物，三条探针分别针对牛、山羊和绵羊源性成分，对牛、山羊和绵羊源性成分检测的扩增目标片段长度分别为92bp、136bp和136bp。本发明中的三重Taq Man荧光PCR检测方法可同时对牛、山羊和绵羊源性成分进行准确的定性检测，操作简便，结果直观，特异性强，灵敏度高，重复性好，可实现多种源性成分的高通量检测。

主权项

1、一种鉴别反刍动物源性成分的荧光PCR检测试剂，其特征在于包含两对特异性引物和三条TaqMan探针，其中，一对引物针对牛源性成分，另一对是针对山羊和绵羊源性成分检测的通用引物，三条探针分别针对牛、山羊和绵羊源性成分，对牛、山羊和绵羊源性成分检测的扩增目标片段长度分别为92bp、136bp和136bp，引物和探针序列如下：A、牛源性成分检测引物和探针序列：引物：B-F：5’-TGGAGTAATCCTTCTGCTCACAGT-3’B-R：5’-TGACTGTTGCTCCTCAGAATGATA-3’探针：B-probe：FAM-5’-AGCATTTATAGGATACGTCC-3’-MGBB、山羊源性成分检测引物和探针序列：引物：G-O-F：5’-AGAAACATGAAACATC(T)GGA-3’G-O-R：5’-ATATGGAATTGCTGAAAGAA(G)-3’探针：G-probe：ROX-5’-TCCTGCTCGCAACAATGGC-3’-MGBC、绵羊源性成分检测引物和探针序列：引物：G-O-F：5’-AGAAACATGAAACATC(T)GGA-3’G-O-R：5’-ATATGGAATTGCTGAAAGAA(G)-3’探针：O-probe：HEX-5’-TCCTATTTGCGACAATAGC-3’-TAMRA。