[发明专利]一种烟草青枯病抗性的苗期鉴定方法

摘要

一种烟草青枯病抗性的苗期鉴定方法，包括保温水池建造、池水加热与循环、青枯菌接种、烟苗、病情调查与分级等步骤，本方法用苗期鉴定结果代替传统大田鉴定结果，在较小面积上鉴定大量材料、一年多次鉴定，提高了结果的可靠性、缩短了鉴定周期、节省场地和试验成本，占地面积小；具有发病迅速、结果重复性好等特点；能有效排除土壤温度差异、菌株致病力差异、菌量差异和其他病害对抗性结果的干扰，有利于年度间和不同实验室间结果重现和比较；抗感品种的发病率和病情指数差异明显，品种的抗性评价结果与他人多年的抗性评价结果基本一致；该方法在抗病资源和育种中间材料的抗性鉴定、抗性遗传规律研究中应用潜力较大。

主权项

一种烟草青枯病抗性的苗期鉴定方法，其特征在于步骤如下：1)建造保温加热循环漂浮池在玻璃温室或塑料大棚温室内建造，池底垫一层厚约4cm的泡沫塑料板，整个池壁四周用泡沫塑料板保温，铺2层塑料膜，池内水深5cm～20cm，一端设由控温电加热棒和池水循环泵构成的加热控温设备加热池水，保持水温为25.0℃～28.0℃：2)烟苗移植及日常管理烟苗两次剪叶后，株高9cm～11cm，苗龄45d～55d，每个待鉴定材料挑选15～200株，用漂浮盘移植到保温加热循环漂浮池中，以NC95品种为抗病对照，以Hicks品种为感病对照，漂浮池营养液的氮素浓度控制在100mg/kg～250mg/kg，在水中加58％甲霜灵锰锌防治真菌病害，根据池水蒸发量，经常补充池水至初始水深，采用自动温湿度记录仪每小时记录一次水温；3)接种将保存的青枯菌菌株使用前在TTC培养基上活化48h，挑典型单菌落至TTC平板培养基上，28℃培养48h；将菌苔刮下，接种到1/10BG培养液，28℃震荡培养36h至48h，培养液于5000×g离心15min收集菌体，用井水或过夜自来水配成菌悬液即可接种，接种时在漂浮池中加入青枯菌悬液，根据菌悬液OD600值，调整池水中菌浓度至1×107cfu/mL～1×108cfu/mL；4)病情调查与分级接种后10d调查发病情况，以后每隔2d～3d调查一次发病情况，记录发病率及病情指数，以感病对照发病率达到80％的病情指数作为品种抗性评价标准。