[发明专利]人TDP-43的单抗包被酶标板的制法及ELISA检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种新的人TDP-43的单抗包被酶标板的制法及ELISA检测试剂盒，其关键技术之处主要在于，用基因工程方法制备特异性的鼠抗人单抗，并将此抗体纯化后包被的酶标板作为试剂盒的重要组成，然后与TDP-43的多抗、辣根过氧化物酶标记的二抗、TDP-43标准品、TDP-43阳性对照、样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液组装为人源TDP-43的ELISA检测试剂盒；建立了敏感快捷的ELISA抗体捕获人血清或细胞、组织培养物中TDP-43浓度的测定方法，具有高特异性，高稳定性。试剂盒主要供一般性实验室或神经病理学临床研究使用。

主权项

1、人TDP-43的单抗包被酶标板的制法，通过下列步骤制备而成：(1)以BC001487DNA为模板，扩增TDP-43基因片段，与载体PET28a连接，转化BL21，表达大量36KD TDP-43蛋白片段；(2)将36KD TDP-43蛋白免疫小白鼠，取其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，选择阳性杂交瘤细胞于鼠腹水中培养，纯化蛋白得到抗TDP-43的单抗；(3)将所得单抗用pH9.6的碳酸盐缓冲溶液稀释后包被96孔板，100μl/孔，4℃16-24小时，PBST洗涤3次，每次30秒，然后除尽孔内液体；(4)用含8％小牛血清的pH7.4的PBS封闭，每孔200μl，37℃，2小时，PBST洗涤3次，干燥后密封；该板即为抗TDP-43的单抗包被的酶标板，可用于TDP-43的特异性检测。