[发明专利]人TDP-43的单抗包被酶标板的制法及ELISA检测试剂盒

权利要求书

1、人TDP-43的单抗包被酶标板的制法，通过下列步骤制备而成：

(1)以BC001487DNA为模板，扩增TDP-43基因片段，与载体PET28a连接，转化BL21，表达大量36KD TDP-43蛋白片段；

(2)将36KD TDP-43蛋白免疫小白鼠，取其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞融合，选择阳性杂交瘤细胞于鼠腹水中培养，纯化蛋白得到抗TDP-43的单抗；

(3)将所得单抗用pH9.6的碳酸盐缓冲溶液稀释后包被96孔板，100μl/孔，4℃16-24小时，PBST洗涤3次，每次30秒，然后除尽孔内液体；

(4)用含8％小牛血清的pH7.4的PBS封闭，每孔200μl，37℃，2小时，PBST洗涤3次，干燥后密封；该板即为抗TDP-43的单抗包被的酶标板，可用于TDP-43的特异性检测。

2、应用权利要求1所述的人TDP-43的单抗包被酶标板的ELISA检测试剂盒，其特征为：由权利要求1所述的抗TDP-43的单抗包被的酶标板、TDP-43标准品、TDP-43的阳性对照样品、抗TDP-43的多抗、样品稀释液、洗涤液、显色液、终止液构成，具体组分为：(1)酶标板：由TDP-43的单抗包被；(2)样品稀释液：含8％小牛血清和1％抗人IgG的pH7.4的0.01mol/l PBS；(3)洗涤液：pH7.4PBST；(4)酶标二抗：购自美国R&D systems的辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)标记的羊抗兔IgG；(5)TDP-43标准品：全长TDP-43的PBS溶液，TDP-43终浓度为1mg/ml；(6)TDP-43阳性对照样品：全长TDP-43的PBS溶液，TDP-43终浓度为5μg/ml；(7)抗TDP-43的多抗：多抗的PBS溶液，多抗的终浓度为1mg/ml；(8)显色液：TMB-H₂O₂系统；(9)终止液：2mol/l H₂SO₄溶液。