[发明专利]人TDP-43的单抗包被酶标板的制法及ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的生物制剂——抗人TDP-43的单抗，和一种用于人源TDP-43的ELISA检测试剂盒，适用于人组织、细胞培养物或血清中TDP-43的定量检测。

技术背景

TDP-43(TAR DNA-binding protein)即TAR DNA结合蛋白，广泛表达在人细胞核内，结合DNA和RNA，调节胞内核酸的转录和拼接，也参与细胞核内小RNA的合成、凋亡和细胞分裂。于1995年被首次发现之后，TDP-43的不正常表达在痴呆病人的血清和尸检中被大量检出。研究表明TDP-43在胞内表达量、定位情况、蛋白质长度、突变或过磷酸化、泛素化修饰均会造成脑组织部分功能的缺失或紊乱(Neumann，M.et al.Ubiquitinated TDP-43 infrontotemporal lobar degeneration and amyotrophic lateral sclerosis[J].Science，2006，314，130-133.)。

在体内，TDP-43表达量的升高通过影响神经胶质的功能而导致的脑神经元毒性。阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)亦称老年性痴呆，占总痴呆症的50-70％，阿尔茨海默病人脑部特征为一些关键位点大量神经元和神经突触的缺失，同时可见β-淀粉样肽斑块和神经纤维损伤，而TDP-43的错误折叠参与了阿尔茨海默病病理发生。

额颞痴呆症(Frontotemporal dementia)发病年龄小于60岁，病例少于阿尔茨海默病，同样不可被治愈。额颞痴呆症表现为肌肉和骨骼的恶性病变，含缬酪肽蛋白(valosin-containingprotein)的病变可导致额颞痴呆，但在FTDU-17型额颞痴呆症病人的尸检中发现，是TDP-43而不是含缬酪肽蛋白的泛素化包含体在患者脑部异常堆积，因此，TDP-43被认为是FTDU-17型额颞痴呆症的一个标识分子。

额颞叶变性(frontotemporal lobar degeneration)有2条蛋白质病理途径，一条为tau途径，另一条为TDP-43途径，后者被认为TDP-43从细胞核中转移，在神经元胞质中渐进累积所致。

运动神经元疾病(motor-neuron disease)也称为肌萎缩性脊髓侧索硬化症(Amyotrophiclateral sclerosis)或葛雷克氏症(Lou Gehrig’s disease)，其症状表现为运动神经元褪化所引起的肌肉渐进性衰弱和痉挛状态。TDP-43的过磷酸化、泛素化或者羧基端某个氨基酸的突变可导致运动神经元疾病。绝大多数运动神经元疾病为TDP-43异常所引起，由过氧化物歧化酶突变所致的病例只占到2％。因此，TDP-43被认为是运动神经元疾病的一个主要的标志蛋白。

佩里综合症(Perry syndrome)表现为体重减轻、情绪低落和肺换气不足，它的病理学特征为TDP-43免疫染色阳性，但与在额颞痴呆症和运动神经元疾病中TDP-43影响中枢神经系统神经元不同的是，TDP-43在佩里综合症影响了锥体外系统的皮层区域和运动神经元。

此外，亦有研究发现错误折叠的TDP-43参与了在帕金森病(Parkinson’s disease)、朊蛋白病(prion diseases)等神经性病理过程。

鉴于TDP-43为神经病理学的一个标记分子(Sleegers，K.and Broeckhoven，C.V.Rogue gene in thefamily[J].Nature，2009，458：415-417.)，该蛋白质异常表达的及时发现将有利于相关病症的早发现早治疗，减轻病人自身和家庭的负担，从而提高人类的生活质量。多数痴呆症平约发病年龄早于50岁，60岁以上人口中老年痴呆症患病比例约为5％，而80岁以上患病比例约为15％，这意味加强TDP-43的检测具有巨大的现实需求和实践意义(Selkoe，D.J.Alzheimer’s diseaseis a synaptic failure[J].Science，2002，298，789-791.)。