[发明专利]一种高效液相色谱检测血液中吡啶硫胺素的方法

摘要

本发明提供了一种高效液相色谱检测血液中吡啶硫胺素含量的方法，其特征在于，具体步骤为：取全血除去蛋白质后采用高效液相色谱检测，其中，色谱条件为：使用C₁₈色谱柱，以第一步所得磷酸氢二钠溶液和磷酸二氢钠溶液分别为第一流动相和第二流动相，以流速1.0mL/min梯度洗脱，荧光检测激发波长为385nm、发射波长为460nm。本发明的优点在于：能够通过简单的方法检测出血液中吡啶硫胺素的含量。

主权项

1、一种高效液相色谱检测血液中吡啶硫胺素的方法，其特征在于，具体步骤为：第一步：将血液在-80℃保存；将铁氰化钾加入到150g/L氢氧化钠溶液中配制0.25g/L铁氰化钾溶液；将吡啶硫胺素加入到0.1M盐酸溶液中配制0.1mM吡啶硫胺素溶液，4℃避光冷藏，测定当日用重量浓度为20％的甲醇溶液稀释配制吡啶硫胺素标准溶液，其浓度为Cs；将磷酸氢二钠加入到重量浓度为10％的甲醇溶液中配制25mmol/L磷酸氢二钠溶液；将磷酸二氢钠加入到重量浓度为70％的甲醇溶液中配制25mmol/L磷酸二氢钠溶液；第二步：将第一步所得吡啶硫胺素溶液与铁氰化钾溶液以体积比25∶3混合，以0.2um孔径过滤膜过滤得到标准溶液，高效液相色谱检测得到吡啶硫胺素的流出时间及其对应的峰面积As，色谱条件为：使用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，分别以第一步所得磷酸氢二钠溶液和磷酸二氢钠溶液为第一流动相和第二流动相，以流速1.0mL/min梯度洗脱，荧光检测激发波长为385nm、发射波长为460nm；第三步：将血液样本避光解冻后，预处理除去蛋白质，以体积比25∶3与第一步所得铁氰化钾溶液混合，以0.2um孔径过滤膜过滤得到样品溶液，采用与第二步相同的色谱条件检测样品溶液，得到与吡啶硫胺素的流出时间对应的峰面积As，按下式计算血液中吡啶硫胺素的浓度Ci：Ci＝Cs·(Ai/As)。