[发明专利]一种测定血清中药物活性成分的方法

摘要

本发明属药物分析领域，涉及一种测定血清中药物活性成分的方法，尤其涉及测定血清中复方中药的活性成分的方法，本发明采用高效液相色谱-质谱联用的方法，分析给药后大鼠血清、空白大鼠血清以及药物的提取液，测定该药物中能进入血液发挥药效的活性成分即药物的作用物质基础，并在此基础上确定这些作用物质基础在药物中的含量。本发明方法能将复方中药作为一个整体进行研究，分析血清中所含的来源于药物的化合物成分群，揭示药物的作用物质基础，并能测定药物活性成分的含量，具有稳定性和重现性好、可操作性强等优点。

主权项

一种测定血清中药物活性成分的方法，其特征是采用高效液相色谱‑质谱联用的方法，分析给药后血清、空白血清及药物的提取液，测定药物活性成分及药物活性成分的含量；包括以下步骤：(1)配制药物提取液：取药物粉末，用混合溶剂超声提取后12000r/min离心，过滤，得药物提取液；(2)制备空白血清样品：羧甲基纤维素钠用纯水制成混悬液，动物灌胃给药后，取静脉血，置涂肝素钠的EP管中，离心，沉淀蛋白后，上清液真空旋转蒸干，得空白血清样品；(3)制备给药后血清样品：药物碎成细粉后，用0.5％的羧甲基纤维素钠制成混悬液，药物的浓度为0.34g/ml，SD大鼠给予药物混悬液灌服3.4g/kg大鼠体重，服药0.5‑3小时后，大鼠腹腔注射1％的戊巴比妥钠溶液麻醉，0.15ml/kg大鼠体重，取静脉血，置涂肝素钠的EP管中，4℃条件下，3000r/min离心10min；取上清液400μl，加入5ml EP管中，沉淀蛋白，涡旋1min，12000r/min离心10分钟，上清液真空旋转蒸干，残渣加入200μl甲醇复溶，离心；上清液即给药后血清样品；(4)高效液相色谱‑质谱联用分析：色谱柱：Waters Symmetry C18色谱柱，5μm，250mm×4.6mm；流动相为甲醇‑水系统、乙腈‑水系统、乙腈‑0.5％乙酸水溶液或乙腈‑0.5％甲酸水溶液；流速0.8mL/min；柱温25℃；电喷雾离子化源ESI，源电压3.5kv；干燥气流速10L/min；干燥气温度350℃；喷雾气压力30psi；MS/MS打碎电压1.0V，扫描的范围为100‑1500u，分别采集正离子和负离子模式下的MS和MS/MS图谱；(5)比较给药血清和空白血清的质谱图，扣除空白血清中的内源性成分，得给药后血清中的差异性成分，即所测得的药物的活性成分。