[发明专利]一种测定血清中药物活性成分的方法

说明书

技术领域

本发明属药物分析领域，涉及一种测定血清中药物活性成分的方法，尤其涉及测定血清中复方中药的活性成分的方法。 

背景技术

复方中药以其独特的疗效和较小的副作用，在临床上应用已经有数千年的历史。但是由于其中存在着众多的化学成分，使得对复方中药的作用物质基础以及复方中药的作用机制的研究相当困难。血清药物化学研究显示，中药中虽含有诸多成分，但只有被吸收入血的成分才能产生作用，被认为药物活性成分。传统中药多为口服给药，口服给药后药物成分或经过消化道直接吸收入血，或经肝微粒体酶代谢后入血，其活性成分以血液为介质输送到靶点，从而产生作用。血清中含有的成分被认为是中药在体内直接起作用的物质。自1992年Homma首次提出血清药物化学的概念以来(Homma M等Analytical Biochemistry 1992；202：179-187.)，血清药物化学已经已经在国际上获得广泛认可。 

麝香保心丸(国药准字Z31020068)主要含麝香、人参提取物、人工牛黄、肉桂、苏合香、蟾酥、冰片。麝香保心丸是芳香温通类治疗胸痹(冠心病、心绞痛)的代表复方中药药物，因其疗效确切、安全方便、价格经济，而成为治疗冠心病、心绞痛的常用药物之一。据统计，麝香保心丸在芳香温通类治疗胸痹的中药中稳居第一，是唯一在全国拥有较高知名度的独家传统中药大品种。所述复方中药的药物活性成分测定已受到本领域研究者的关注。 

发明内容

本发明的目的是提供一种测定血清中药物活性成分的方法，具体涉及一种测定血清中治疗心血管疾病的复方中药的活性成分的方法。 

本发明所涉及的治疗心血管疾病的复方中药是麝香保心丸(国药准字Z31020068)主要含下述原料药组分：麝香、人参提取物、人工牛黄、肉桂、苏合香、蟾酥、冰片，目前该药物的作用物质基础仍然不明确。 

由于中药成分复杂，导致药物作用物质基础不明确。现有对中药的药效成分研究多偏重于单个成分的药理药效评价，脱离了中医整体协同作用的理论。本发明将复方中药作为一个整体进行研究，本发明采用高效液相色谱-质谱联用的方法，分析给药后大鼠血清、空白大鼠血清以及药物的提取液，测定该药物中能进入血液发挥药效的活性成分即药物的作用物质基础，并在此基础上确定这些作用物质基础在药物中的含量。 

本发明方法包括如下步骤： 

1.配制药物提取液 

取500mg药物粉末，用6.5ml混合溶剂超声提取后12000r/min离心，上清液过0.45μm滤膜过滤，得到配制的药物提取液； 

本发明在制备药物提取液中，采用的混合溶剂及其比例为甲醇∶二氯甲烷∶水＝4∶2∶0.5(V/V)，超声时间为20min。 

2.制备空白血清样品 

羧甲基纤维素钠用纯水制成0.5％的混悬液，用于SD大鼠灌胃给药(1ml/kg大鼠体重)，灌胃0.5-3小时后，腹腔注射1％的戊巴比妥钠溶液(0.15ml/kg大鼠体重)麻醉大鼠，静脉取血，置于涂肝素钠的EP管中，在4℃条件下，3000r/min离心10min；取上清液400μl，加入到5ml EP管中；沉淀蛋白后，涡旋1min，12000r/min离心10分钟，上清液真空旋转蒸干，残渣加入200μl甲醇复溶，离心；上清液即为空白血清样品； 

3.制备给药后血清样品 

所述复方中药药物粉碎成细粉后，用0.5％的羧甲基纤维素钠制成混悬液，药物的浓度为0.34g/ml；SD大鼠给予药物混悬液灌服(3.4g/kg大鼠体重)。服药0.5-3小时后，大鼠腹腔注射1％的戊巴比妥钠溶液(0.15ml/kg大鼠体重)麻醉，静脉取血，置涂肝素钠的EP管中，4℃条件下，3000r/min离心10min，取上清液400μl，加入5ml EP管中，沉淀蛋白后，涡旋1min，12000r/min离心10分钟，上清液真空旋转蒸干，残渣加入200μl甲醇复溶，离心；上清液即为给药后血清样品； 

本发明在制备空白或给药血清样品中，采用灌胃后2小时从肝门静脉取血，每400μl血清用甲醇3ml沉淀蛋白；流动相为乙腈∶0.5％甲酸水溶液。 

4.高效液相色谱-质谱联用分析