[发明专利]大家白蚁快速PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种对大家白蚁进行快速检测的PCR检测方法，包括常规PCR检测和实时荧光PCR检测，步骤包括：待检样品DNA模板的制备，设计特异性引物和/或探针，建立PCR反应体系进行PCR扩增，凝胶成像系统上观察记录和拍照。本发明是一种快速、稳定可靠、灵敏度高的大家白蚁PCR检测方法，适用于大家白蚁不同品级样本的检测，为我国乳白蚁属在分子水平上的分类和近缘种的快速鉴定奠定了基础。研究结果可直接应用于进出境植物检疫中大家白蚁的检疫鉴定，这对保护我国农林业生产安全、维持生态平衡，保证公共卫生安全都有极为重要的意义。

主权项

1、一种大家白蚁快速PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待检样品，采用SDS法提取基因组DNA，制备模板DNA，-20℃保存备用；(2)建立PCR反应体系：取上游引物CC-F5、下游引物CC-R5、10×PCR缓冲液、MgCl2、dNTP混合物、Taq DNA聚合酶和ddH2O，加入待检模板DNA，配成PCR反应体系；其中所述上游引物CC-F5和下游引物CC-R5核苷酸序列分别为：上游引物CC-F5：5’-AGCACGGACCTGTCCGATGCC-3’下游引物CC-R5：5’-CCATCTTCGGGCCCGCGGCCT-3’；(3)进行PCR扩增，PCR反应条件是：预变性94℃，5min；94℃变性1min，退火延伸72℃，1min，30个循环；最后72℃延伸5min；(4)rDNA ITS区扩增完成后，取PCR反应产物及上样缓冲液在1.5％的琼脂糖TAE凝胶电泳分离，电泳后经EB染色，凝胶成像系统上观察记录和拍照。