[发明专利]大家白蚁快速PCR检测方法无效
| 申请号： | 200910041946.1 | 申请日： | 2009-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN101665828A | 公开（公告）日： | 2010-03-10 |
| 发明（设计）人： | 乐海洋;张卫东;廖力 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 广州市红荔专利代理有限公司 | 代理人： | 王贤义 |
| 地址： | 519015广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大家 白蚁 快速 pcr 检测 方法 | ||
1.一种大家白蚁快速PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取待检样品，采用SDS法提取基因组DNA，制备模板DNA，-20℃ 保存备用；
(2)建立PCR反应体系：
取上游引物CC-F6、下游引物CC-R8、引物探针CC-TZ-6、10×PCR 缓冲液、MgCl2、dNTP混合物、Taq DNA聚合酶和ddH2O，加入待 检模板DNA，配成PCR反应体系；其中所述上游引物CC-F6、下游 引物CC-R8和探针CC-TZ-6的核苷酸序列分别为：
上游引物CC-F6：5’-AGGCCGCGGGCCCGAAGATGG-3’
下游引物CC-R8：5’-CCGAGATCTCTCTCGTATTTTC-3’
引物探针CC-TZ-6：
5’-FAM-ACGACAGCACTGTCTTAATCTTCG-TAMRA-3’，其中FAM 为荧光报告基团，TAMRA为荧光淬灭基团；
(3)进行PCR扩增，PCR反应条件是：预变性94℃，1min；94℃变性15s， 60℃退火延伸1min，45个循环；
(4)荧光PCR仪读取Ct值判断检测的结果。
2.根据权利要求1所述的大家白蚁快速PCR检测方法，其特征在于：所述 PCR反应体系的反应总体积为20μl，各成分组成如下：2μl的10×PCR缓 冲液、25mmol/mL的MgCl2 2μl、各10mmol/mL的dNTP混合物1.6μl、 0.5μl的上游引物CC-F6、0.5μl的下游引物CC-R8、0.25μl的引物探针 CC-TZ-6、Taq DNA聚合酶0.5U、模板DNA 2μl，加ddH2O至最终体积。
3.根据权利要求1所述的大家白蚁快速PCR检测方法，其特征在于：所述 上游引物CC-F6和下游引物CC-R8的使用浓度为0.1～0.5μmol/mL，所 述荧光探针CC-TZ-6的使用浓度为0.05～0.2μmol/mL。
4.根据权利要求1所述的大家白蚁快速PCR检测方法，其特征在于：所述 模板DNA的检测限度在0.1pg/μl。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中华人民共和国珠海出入境检验检疫局，未经中华人民共和国珠海出入境检验检疫局许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200910041946.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
