[发明专利]一种体外扩增调节性T细胞的方法

摘要

本发明涉及一种扩增细胞的方法，尤其是一种体外扩增调节性T细胞的方法，属于生物医学技术领域。本发明采用Rapamycin联合TGF-β在体外诱导人的T细胞成为具有免疫抑制功能的调节性T细胞，具有以下优点：1)数量充分；2)能抵抗向Th17细胞分化。克服了自然的调节性T细胞的诸多缺陷，在炎症性疾病的治疗，自身免疫性疾病治疗和器官移植的免疫排斥的预防方面有更大的治疗优势。

主权项

1.一种体外扩增调节性T细胞的方法，包括以下步骤：第一步、采集：采用肝素抗凝常规采血手段采集血液；第二步、分离：从采集到的血液中离心分离出外周血淋巴细胞，再由外周血淋巴细胞分离得到原始CD4+T细胞；第三步、培养：将原始CD4+T细胞置于培养基中，在37℃±5℃、5％±1％CO2的条件下，培养7-10天；第四步、诱导：对培养后的原始CD4+T细胞进行刺激，并加入诱导剂培养原始CD4+T细胞，直至细胞密度扩增至初始培养浓度的10倍，停止诱导，即得调节性T细胞；第五步、扩增：由调节性T细胞中分选出CD4+CD27+T细胞，移入含有10ng/mL anti-humanCD3的细胞培养板中，加入扩增剂持续刺激，培养至细胞扩增达到10倍，收集细胞，向其中每106个细胞加入1μl的anti-hCD4-PE抗体和每106个细胞加入1μl的anti-hCD27-FITC抗体，再分选得到扩增后的CD4+CD27+调节性T细胞。