[发明专利]一种X染色体STR基因位点分型的荧光检测方法

摘要

本发明公开了一种X染色体STR基因位点分型的荧光检测方法，包括等位基因分型标准物的制备：分别以包含3个X染色体STR基因位点DXS7132、DXS6799和DXS6804的不同基因型的质粒为模板，以5’端标记有荧光分子的引物对为引物PCR扩增，将全部的等位基因的片段按照分子量等比混合得到等位基因分型标准物；在同一扩增体系PCR扩增待测X染色体包含的3个X染色体的STR等位基因；荧光检测分型以PCR扩增到的带有荧光分子标记的等位基因分型标准物和待测X染色体的STR等位基因片段进行毛细管电泳分离进行标准化分型。本发明应用于亲子鉴定、个体识别、性别鉴定、X连锁遗传致病基因定位、易感基因的检出。

主权项

1、一种X染色体STR基因位点分型的荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)等位基因分型标准物的制备：分别以包含3个X染色体STR基因位点DXS7132、DXS6799和DXS6804的不同基因型的质粒为模板，以5’端标记有荧光分子的引物对为引物，PCR扩增上述X染色体STR基因位点全部的等位基因，并确定PCR扩增出的等位基因的片段大小，将全部的等位基因的片段按照等摩尔比混合得到等位基因分型标准物；其中，DXS7132基因位点PCR扩增的引物对为：上游引物：agcccatttt cataataaat cc 22；下游引物：荧光分子-aatcagtgct ttctgtacta ttgg 24；DXS6799基因位点PCR扩增的引物对为：上游引物：荧光分子-atgaattcag aattatcctc atacc 25；下游引物：gaaccaacct gcttttctga 20；DXS6804基因位点PCR扩增的引物对为：上游引物：荧光分子-cccagatatt ttgaccacca 20；下游引物：ggcatgtggt tgctataacc 20；2)PCR扩增待测X染色体的STR等位基因：以包含待测X染色体的基因组为模板，以步骤1)所述的3个X染色体的STR基因位点PCR扩增的引物对为引物，在同一扩增体系PCR扩增待测X染色体包含的3个X染色体的STR等位基因；3)荧光检测分型以PCR扩增到的带有荧光分子标记的等位基因分型标准物和待测X染色体的STR等位基因片段进行毛细管电泳分离；采用荧光显色方法，根据电泳分离结果对待测X染色体进行标准化分型。