[发明专利]添加在饲料中植酸酶的微量测定方法有效
| 申请号： | 200910009424.3 | 申请日： | 2009-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN101493418A | 公开（公告）日： | 2009-07-29 |
| 发明（设计）人： | 史宝军;陈丽芝;崔细鹏;刘金山 | 申请（专利权）人： | 广东溢多利生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/75 | 分类号： | G01N21/75;G01N1/28 |
| 代理公司： | 北京安博达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 徐国文 |
| 地址： | 519060广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种添加在饲料中植酸酶活性的微量测定方法。该方法首先，用乙酸缓冲液I作为透析外液对样品进行透析处理，降低饲料中无机磷含量，以消除饲料中的无机磷对植酸酶水解反应的影响；其次，在反应时取待反应液体积1ml代替现有方法中的0.2ml，加1ml乙酸缓冲液I代替现有方法的1.8ml乙酸缓冲液I，使样品空白的吸光值落在一个合理的测定范围内，以避免因样品空白中无机磷含量过高而引起测定的误差；第三，在饲料中添加已知酶，通过测定已知酶，检验已知酶在样品提取、透析、测定过程中是否有损失。本发明能够准确测定添加在饲料中植酸酶含量。 | ||
| 搜索关键词： | 添加 饲料 中植酸酶 微量 测定 方法 | ||
【主权项】：
1、一种添加在饲料中植酸酶的微量测定方法，特征在于，其步骤如下：(1)试剂和溶液的配制(1.1)乙酸缓冲液(I)，c(CH3COONa)＝0.25mol/l：称取34.02g三水乙酸钠于1000ml烧杯中，加入900ml水搅拌溶解，用冰乙酸调节pH值至5.00±0.01，再转移至1000ml容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度；室温下存放2个月内有效；(1.2)乙酸缓冲液(II)，c(CH3COONa)＝0.25mol/l：称取34.02g三水乙酸钠，0.5g牛血清白蛋白(BSA)于1000ml烧杯中，加入900ml水搅拌溶解，用冰乙酸调节pH值至5.00±0.01，再转移至1000ml容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度；室温下存放2个月内有效；(1.3)植酸钠溶液(C6H6O24P6Na12)为7.5mmol/L：称取0.6929g植酸钠(C6H6O24P6Na12，相对分子质量为923.8，纯度为95％)，精确至0.1mg，置于100ml烧杯中，用约80ml乙酸缓冲液(I)溶解，用冰乙酸调节pH值至5.00±0.01，转移至100ml容量瓶中，并用乙酸缓冲液(I)定容至刻度，现用现配(实际反应液中的最终浓度为5.0mmol/l)；(1.4)硝酸溶液：1份浓硝酸+2份水；(1.5)钼酸铵溶液，100g/l：称取10g钼酸铵[NH4)6Mo7O24·4H2O]于50ml烧杯中加水溶解，再转移至100ml容量瓶中，加入1.0ml氨水(25％)用水定容至刻度；(1.6)偏钒酸铵溶液，2.35g/l：称取0.235g偏钒酸铵(NH4VO3)于50ml烧杯中，加入2ml硝酸溶液及少量水，并用玻璃棒研磨溶解，再转移至100ml棕色容量瓶中，用水定容至刻度；避光条件下保存；(1.7)颜色终止液：取2份硝酸溶液，1份钼酸铵溶液，1份钒酸铵溶液混合使用，现用现配；(1.8)标准植酸酶(标明准确活性单位和类型)；(2)测定(2.1)标准曲线准确称取一定量的标准植酸酶，精确至0.0001g，于50ml容量瓶中，用乙酸缓冲液(II)溶解并定容至刻度，做两次稀释，使植酸酶活性为0.30U/ml左右，当日配制；将上述植酸酶按表1用缓冲液(II)进行稀释，需要准确计算植酸酶的浓度，与样品一起反应测定，以植酸酶浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，列出直线回归方程(y＝ax+b)：表1
