[发明专利]苹果多酚氧化酶的提取及测定方法

摘要

本发明公开了一种苹果多酚氧化酶的提取及测定方法。苹果冷冻后取其果肉，加入冷丙酮，用高速组织捣碎机捣成匀浆，抽滤，滤饼用冷冻丙酮再次提取抽滤，得到的白色物质真空干燥，即得PPO丙酮粉。将丙酮粉溶于磷酸盐缓冲溶液中，用磁力搅拌器搅拌离心，上清液过滤，即得粗酶液。然后用分光光度仪扫描观察吸收峰情况确定物质的结构。最后采用比色法测定PPO的活性。

主权项

苹果多酚氧化酶的提取及测定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)多酚氧化酶(简称PPO)的提取苹果洗净后在低温下保温，再去皮去核后取其果肉，立即加入冷丙酮，用高速组织捣碎机匀浆2min，而后用布氏漏斗抽滤滤饼用前一次1/2量的冷冻丙酮再次提取抽滤，得到的白色物质冷冻真空干燥，即得PPO丙酮粉。称取丙酮粉，溶于的预冷磷酸盐缓冲溶液中，用磁力搅拌器搅拌离心，上清液过滤，即得苹果PPO粗酶液。(2)多酚氧化酶测定方法在1ml磷酸氢二钾-柠檬酸缓冲液中，用1ml0.1mol/L邻苯二酚为底物，加1ml酶提取液，反应3min后，在分光光度仪扫描并观察吸收峰情况。测定时以水为空白，以热失活的粗酶液代替粗酶液在同样条件下测定为对照。(3)PPO活性的测定取磷酸盐缓冲溶液1ml于1cm比色皿中，加人0.1mol/L邻苯二酚溶液1ml。混匀后在400mm处比色，从酶液加入后开始记时，每15s记录一次OD随时间的变化值，以最初直线段的斜率(ΔOD/t)表求酶活力，一个酶活力单位(U)定义为：在测定条件下，每分钟引起吸光度改变0.001所需的酶量。