[发明专利]一种利用里氏木霉纤维素酶制备壳寡糖的方法

摘要

一种利用里氏木霉纤维素酶制备壳寡糖的方法，纯化的壳聚糖粉末用水溶胀后，加入乙酸溶液使之充分溶解，用乙酸氨或乙酸钠水溶液溶解黑曲酶纤维素酶，配制成浓度为0.5－2mg/ml的酶液；在温度为40－55℃下，加入酶液进行酶解反应，得到低分子量壳聚糖，通过丙酮－水分级沉淀后，浓缩干燥可得到不同分布范围的低聚壳聚糖产品。本发明的优点是：反应条件温和，不采用强酸强碱，避免了寡聚体的破坏，不会造成环境污染，是壳聚糖降解的理想方法。

主权项

1、一种利用里氏木霉纤维素酶制备壳寡糖的方法，其特征是方法步骤为：(1)以里氏木霉菌种经培养发酵生产出纤维素酶；(2)壳聚糖的纯化：称取20g壳聚糖，先加入少许水溶胀后，再加入1％的乙酸溶液使之充分溶解，进行减压抽滤，弃除杂质，取其滤液，加入1mol/L的氢氧化钠溶液，使壳聚糖沉淀出来，用水漂洗至中性，减压抽滤干燥后，加200mL无水乙醇，40-50℃水浴加热2小时，放在干燥箱里烘干后，碾成粉末备用；(3)壳聚糖的酶解：量取一定量的经步骤2纯化的壳聚糖溶液倒入三角瓶中，置于水浴振荡器中至恒温50℃后，再加入相应比例的纤维素酶液，摇晃均匀，转速100r/min，反应结束后立刻取出，煮沸10min使酶灭活，然后减压抽滤移走酶；(4)降解：在温度50℃、pH5.0、壳聚糖∶酶为5∶1的条件下，酶解1-24h；(5)丙酮-水分级萃取：壳聚糖水解后的滤液在减压条件下浓缩直到最后体积为初始体积的10％，然后与等体积丙酮混合得到沉淀，在4000转/分离心30分钟收集该沉淀，使用50％丙酮洗脱几次，然后在真空干燥箱中干燥，得A部分，剩余的溶液在减压蒸馏下浓缩到约原体积的5％，然后加入9体积丙酮使之充分混合产生沉淀，离心收集形成的沉淀，用90％丙酮洗涤，减压干燥，得B部分。