[发明专利]一种利用里氏木霉纤维素酶制备壳寡糖的方法

权利要求书

1、一种利用里氏木霉纤维素酶制备壳寡糖的方法，其特征是方法步骤为：

(1)以里氏木霉菌种经培养发酵生产出纤维素酶；

(2)壳聚糖的纯化：称取20g壳聚糖，先加入少许水溶胀后，再加入1％的乙酸溶液使之充分溶解，进行减压抽滤，弃除杂质，取其滤液，加入1mol/L的氢氧化钠溶液，使壳聚糖沉淀出来，用水漂洗至中性，减压抽滤干燥后，加200mL无水乙醇，40-50℃水浴加热2小时，放在干燥箱里烘干后，碾成粉末备用；

(3)壳聚糖的酶解：量取一定量的经步骤2纯化的壳聚糖溶液倒入三角瓶中，置于水浴振荡器中至恒温50℃后，再加入相应比例的纤维素酶液，摇晃均匀，转速100r/min，反应结束后立刻取出，煮沸10min使酶灭活，然后减压抽滤移走酶；

(4)降解：在温度50℃、pH5.0、壳聚糖∶酶为5∶1的条件下，酶解1-24h；

(5)丙酮-水分级萃取：壳聚糖水解后的滤液在减压条件下浓缩直到最后体积为初始体积的10％，然后与等体积丙酮混合得到沉淀，在4000转/分离心30分钟收集该沉淀，使用50％丙酮洗脱几次，然后在真空干燥箱中干燥，得A部分，剩余的溶液在减压蒸馏下浓缩到约原体积的5％，然后加入9体积丙酮使之充分混合产生沉淀，离心收集形成的沉淀，用90％丙酮洗涤，减压干燥，得B部分。

2、根据权利要求1所述的一种利用里氏木霉纤维素酶制备壳寡糖的方法，其特征在于，所述的乙酸浓度为0.1-2wt％，所述的乙酸氨或乙酸纳水溶液的pH为4-7，浓度为0.001M-0.5M。

3、根据权利要求1所述的一种利用里氏木霉纤维素酶制备壳寡糖的方法，其特征在于采用不同体积比的丙酮-水对酶解后的产物进行分子量分级。