[发明专利]一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法

摘要

一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，在2～6℃条件下依次进行如下操作：首先用抗凝猪全血制备得压积红细胞；用低渗溶液溶解压积红细胞并通入惰性气体，加入抗氧化剂并调节溶液pH值，加入保护剂和抑菌药物，高速离心后得粗制血红蛋白溶液；往粗制血红蛋白溶液中加入甲苯，低温下萃取后取下层血红蛋白溶液进行透析；透析后的血红蛋白溶液冷冻干燥后再溶解成高浓度小体积的液体并上样于葡聚糖凝胶层析柱纯化，收取分子量均一的高纯度血红蛋白经过滤除菌去热原，然后冷冻真空干燥，得高纯度无基质无热源的血红蛋白干粉。用本发明方法得到的血红蛋白无基质无热源，能安全有效地进行进一步修饰以制造血液代用品，操作简便，成本低廉。

主权项

1、一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤，各步骤均在2～6℃温度条件下进行：(1)将抗凝猪全血经离心去除血浆、白细胞及血小板，用生理盐水洗涤红细胞2～4次，低速离心后得到压积红细胞；(2)用2～8倍于压积红细胞体积的低渗溶液溶解压积红细胞，通入惰性气体，在溶血液中加入抗氧化剂，调节溶液pH值至7.0～7.4，再加入保护剂至终浓度为1～5％，加入抑菌药物，充分搅拌1～4小时，高速离心10～30分钟后取上清得到粗制血红蛋白溶液；(3)往粗制血红蛋白溶液中加入体积是粗制血红蛋白溶液1/10～1/4的甲苯，震荡摇匀后低温条件下萃取2～6小时，取下层血红蛋白溶液；(4)将血红蛋白溶液装入透析袋中，在加有保护剂和抑菌药物的透析液中透析36～72小时，中间更换1～3次透析液，去除残留甲苯和小分子物质；(5)将透析后的血红蛋白溶液加入保护剂，冷冻真空干燥成干粉后再溶解成高浓度、小体积的液体，上样于葡聚糖凝胶层析柱纯化，收取分子量均一的高纯度血红蛋白；(6)将高纯度血红蛋白经过滤除菌去热原，加入保护剂，然后冷冻真空干燥，得到高纯度、无基质、无热源的血红蛋白干粉。