[发明专利]一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法

权利要求书

1.一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤，各步骤均在2～6℃温度条件下进行：

(1)将抗凝猪全血经离心去除血浆、白细胞及血小板，用生理盐水洗涤红细胞2～4次，低速离心后得到压积红细胞；

(2)用2～8倍于压积红细胞体积的低渗溶液溶解压积红细胞，通入惰性气体，在溶血液中加入抗氧化剂，调节溶液pH值至7.0～7.4，再加入保护剂至终浓度为1～5％，加入抑菌药物，充分搅拌1～4小时，高速离心10～30分钟后取上清得到粗制血红蛋白溶液；

(3)往粗制血红蛋白溶液中加入体积是粗制血红蛋白溶液1/10～1/4的甲苯，震荡摇匀后低温条件下萃取2～6小时，取下层血红蛋白溶液；

(4)将血红蛋白溶液装入透析袋中，在加有保护剂和抑菌药物的透析液中透析36～72小时，中间更换1～3次透析液，去除残留甲苯和小分子物质；

(5)将透析后的血红蛋白溶液加入保护剂，冷冻真空干燥成干粉后再溶解成高浓度、小体积的液体，上样于葡聚糖凝胶层析柱纯化，收取分子量均一的高纯度血红蛋白；

(6)将高纯度血红蛋白经过滤除菌去热原，加入保护剂，然后冷冻真空干燥，得到高纯度、无基质、无热源的血红蛋白干粉。

2.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，其特征在于步骤(1)中所取猪全血为活猪动脉血，生理盐水是浓度为0.9％的NaCl溶液。

3.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，其特征在于步骤(2)中所述低渗溶液为0.01mol/L的NaCl溶液或低渗PBS溶液，所述惰性气体为氮气或氩气。

4.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，其特征在于步骤(2)中所述抗氧化剂是pH值为7.0～7.4的维生素C，步骤(2)和步骤(4)中所述的抑菌药物是100U/ml的青霉素或/和链霉素。

5.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，其特征在于步骤(2)中所述的保护剂是葡萄糖。

6.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取高纯度血红蛋白的方法，其特征在于步骤(5)和步骤(6)中所述的保护剂是蔗糖。