[发明专利]一种采用核酸连接酶进行单核苷酸多态性检测的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测待测核酸第x位碱基的单核苷酸多态性(SNP)的方法。本发明还公开了检测待测核酸第x位碱基的单核苷酸多态性的芯片以及试剂盒。本发明的方法将寡核苷酸碱基互补及连接反应的特性与多通道电化学高通量、检测快速的特点相结合，可以迅速且准确地检测出SNP位点的碱基类型。

主权项

1.一种检测待测核酸第x位碱基的单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述方法包括：(a)提供一种芯片，所述的芯片包括：基片，所述的基片表面是一金属基面，其上具有区域1，区域2，区域3，和/或区域4，其中，区域1固定有游离端末端碱基是A的捕获探针，区域2固定有游离端末端碱基是T的捕获探针，区域3固定有游离端末端碱基是C的捕获探针，区域4固定有游离端末端碱基是G的捕获探针，其中，当所述捕获探针的游离端为3端时，与所述末端碱基相邻的5-100bp碱基与所述待测核酸第x位碱基之后且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补；当所述捕获探针的游离端为5端时，与所述末端碱基相邻的5-100bp碱基与所述待测核酸第x位碱基之前且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补；(b)将待测核酸、信号探针和核酸连接酶加样于所述芯片的区域1，区域2，区域3和区域4，进行连接反应；其中，当所述捕获探针的游离端为3端时，所述信号探针的序列自5端起的5-100bp碱基与待测核酸第x位碱基之前且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补，且所述的信号探针的3末端连接有电流反应检测信号；当所述捕获探针的游离端为5端时，所述信号探针的序列自3端起的5-100bp碱基与待测核酸第x位碱基之后且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补，且所述的信号探针的5末端连接有电流反应检测信号；(c)对(b)的芯片上的核酸进行变性处理，去除非固定于基片的核酸链和未反应的信号探针；(d)电化学法检测(c)获得的芯片上区域1，区域2，区域3，和/或区域4的电流反应检测信号，若电流反应检测信号位于区域1，则待测核酸第x位碱基是T；若电流反应检测信号位于区域2，则待测核酸第x位碱基是A；若电流反应检测信号位于区域3，则待测核酸第x位碱基是G；若电流反应检测信号位于区域4，则待测核酸第x位碱基是C；其中，x为11-1000000的正整数。