[发明专利]一种采用核酸连接酶进行单核苷酸多态性检测的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测待测核酸第x位碱基的单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)提供一种芯片，所述的芯片包括：基片，所述的基片表面是一金属基面，其上具有区域1，区域2，区域3，和/或区域4，其中，

区域1固定有游离端末端碱基是A的捕获探针，

区域2固定有游离端末端碱基是T的捕获探针，

区域3固定有游离端末端碱基是C的捕获探针，

区域4固定有游离端末端碱基是G的捕获探针，

其中，当所述捕获探针的游离端为3端时，与所述末端碱基相邻的5-100bp碱基与所述待测核酸第x位碱基之后且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补；当所述捕获探针的游离端为5端时，与所述末端碱基相邻的5-100bp碱基与所述待测核酸第x位碱基之前且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补；

(b)将待测核酸、信号探针和核酸连接酶加样于所述芯片的区域1，区域2，区域3和区域4，进行连接反应；

其中，当所述捕获探针的游离端为3端时，所述信号探针的序列自5端起的5-100bp碱基与待测核酸第x位碱基之前且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补，且所述的信号探针的3末端连接有电流反应检测信号；当所述捕获探针的游离端为5端时，所述信号探针的序列自3端起的5-100bp碱基与待测核酸第x位碱基之后且与该第x位碱基相邻的5-100bp碱基特异性互补，且所述的信号探针的5末端连接有电流反应检测信号；

(c)对(b)的芯片上的核酸进行变性处理，去除非固定于基片的核酸链和未反应的信号探针；

(d)电化学法检测(c)获得的芯片上区域1，区域2，区域3，和/或区域4的电流反应检测信号，

若电流反应检测信号位于区域1，则待测核酸第x位碱基是T；

若电流反应检测信号位于区域2，则待测核酸第x位碱基是A；

若电流反应检测信号位于区域3，则待测核酸第x位碱基是G；

若电流反应检测信号位于区域4，则待测核酸第x位碱基是C；

其中，x为11-1000000的正整数。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的金属基面上每一区域具有测定电流反应用电极。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的金属基面上还固定有具有通式(I)结构的化学分子：

HS-(CH₂)_n-(OC₂H₅)_m-R    (I)；

其中，R选自：OH，H，OCH₃，CH₃，OC₂H₅，C₂H₅，OCH₂COOH，NH₂；

m为选自0-12的正整数；

n为选自3-15的正整数。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的金属选自：金，铂，钯或银。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，所述的电流反应检测信号是特异性催化电流反应的酶，并且步骤(d)的检测过程包括：

将所述特异性催化电流反应的酶的底物和/或电子传递媒介加样于区域1，区域2，区域3，和/或区域4；检测各区域产生的电流反应信号，从而确定电流反应检测信号的存在区域。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，所述的电流反应检测信号是酶联免疫可偶联分子，并且步骤(d)的检测过程包括：

将“酶联免疫可偶联分子的偶联物-特异性催化电流反应的酶”复合物加样于区域1，区域2，区域3，和/或区域4，从而在酶联免疫可偶联分子末端偶联上“酶联免疫可偶联分子的偶联物-特异性催化电流反应的酶”；

将所述特异性催化电流反应的酶的底物和/或电子传递媒介加样于区域1，区域2，区域3，和/或区域4；检测各区域产生的电流反应信号，从而确定电流反应检测信号的存在区域。