[发明专利]山楂叶中单体化合物的分离纯化方法

摘要

本发明涉及医药技术领域，具体涉及从山楂叶中分离纯化单体化合物4″′－O－鼠李糖芦丁、牡荆素－2″－O－鼠李糖苷和4″－O－葡萄糖牡荆素的方法。国内外多采用柱色谱法和重结晶等分离纯化山楂叶中的有效单体。本发明的方法包括用水或乙醇水溶液浸泡或回流制备山楂叶粗提物，采用大孔吸附树脂先分别以水和低浓度乙醇洗脱去除水溶性杂质，再用较低浓度乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得山楂叶大孔吸附树脂提取物，再采用高速逆流色谱和制备液相色谱相结合的方法对该提取物进行分离纯化，即得纯度高于99％的4″′－O－鼠李糖芦丁、牡荆素－2″－O－鼠李糖苷和4″－O－葡萄糖牡荆素。本发明制备方法操作简便、分离效率高、产品纯度好，适于工业化生产。

主权项

1.一种从山楂叶中分离纯化单体化合物4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：A.制备山楂叶粗提物：按常规将干燥山楂叶粗粉以水或乙醇水溶液浸泡或回流提取1～3次，过滤，将滤液减压浓缩至无醇味，得山楂叶粗提液；B.纯化：(a)用大孔吸附树脂纯化：将上述制得的山楂叶粗提液加适量水混悬后，过大孔吸附树脂柱，先分别用水和5％～15％浓度的乙醇溶液充分洗脱，弃去洗脱液，再用20％～30％浓度的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得提取物，经高效液相色谱检测，含有90％以上4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素，得率为3％～5％；(b)用高速逆流色谱和制备液相色谱将4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素分离纯化：构成高速逆流色谱固定相、流动相的溶剂体系为正丁醇∶水＝1∶1、乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶4或乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶3，在分液漏斗中充分振摇后静止分层，上相为固定相，下相为流动相；先使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使主机转动，再泵入流动相，取步骤(a)中所得的提取物溶于少量下相，由进样阀进样，根据检测器谱图接收流分“I”、“II”；采用高效液相色谱法对所得流分进行纯度检测，测得流份“II”为单一色谱峰，纯度高于99％，流份“I”中含两个主要色谱峰，两峰总纯度高于95％；再应用制备液相色谱对流份“I”分离纯化，得流份“III”、“VI”，按上述高效液相色谱法检测，两个化合物纯度均高于99％；挥干溶剂后对流分“II”、“III”、“VI”进行MS、1HNMR和13CNMR分析，根据所得数据进行结构确认，流分“II”为牡荆素-2″-O-鼠李糖苷，流分“III”为4-O-鼠李糖芦丁，流分“VI”为4″-O--葡萄糖牡荆素。