[发明专利]山楂叶中单体化合物的分离纯化方法

权利要求书

1.一种从山楂叶中分离纯化单体化合物4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

A.制备山楂叶粗提物：

按常规将干燥山楂叶粗粉以水或乙醇水溶液浸泡或回流提取1～3次，过滤，将滤液减压浓缩至无醇味，得山楂叶粗提液；

B.纯化：

(a)用大孔吸附树脂纯化：将上述制得的山楂叶粗提液加适量水混悬后，过大孔吸附树脂柱，先分别用水和5％～15％浓度的乙醇溶液充分洗脱，弃去洗脱液，再用20％～30％浓度的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得提取物，经高效液相色谱检测，含有90％以上4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素，得率为3％～5％；

(b)用高速逆流色谱和制备液相色谱将4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素分离纯化：构成高速逆流色谱固定相、流动相的溶剂体系为正丁醇∶水＝1∶1、乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶4或乙酸乙酯∶正丁醇∶水＝2∶1∶3，在分液漏斗中充分振摇后静止分层，上相为固定相，下相为流动相；先使逆流色谱仪柱子中充满固定相，然后使主机转动，再泵入流动相，取步骤(a)中所得的提取物溶于少量下相，由进样阀进样，根据检测器谱图接收流分“I”、“II”；采用高效液相色谱法对所得流分进行纯度检测，测得流份“II”为单一色谱峰，纯度高于99％，流份“I”中含两个主要色谱峰，两峰总纯度高于95％；再应用制备液相色谱对流份“I”分离纯化，得流份“III”、“VI”，按上述高效液相色谱法检测，两个化合物纯度均高于99％；挥干溶剂后对流分“II”、“III”、“VI”进行MS、¹HNMR和¹³CNMR分析，根据所得数据进行结构确认，流分“II”为牡荆素-2″-O-鼠李糖苷，流分“III”为4-O-鼠李糖芦丁，流分“VI”为4″-O--葡萄糖牡荆素。

2.根据权利要求1所述的一种从山楂叶中分离纯化单体化合物4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素的方法，其特征在于制备山楂叶粗提液时，用60％乙醇回流提取。

3.根据权利要求1所述的一种从山楂叶中分离纯化单体化合物4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素的方法，其特征在于用大孔吸附树脂纯化时，先分别用水和10％浓度的乙醇溶液充分洗脱，弃去洗脱液，再用20％～30％浓度的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得提取物。

4.根据权利要求1所述的一种从山楂叶中分离纯化单体化合物4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素的方法，其特征在于用大孔吸附树脂纯化时，先分别用水和5％～15％浓度的乙醇溶液充分洗脱，弃去洗脱液，再用20％浓度的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥，即得提取物。

5.根据权利要求1所述的一种从山楂叶中分离纯化单体化合物4-O-鼠李糖芦丁、牡荆素-2″-O-鼠李糖苷和4″-O-葡萄糖牡荆素的方法，其特征在于所述的大孔吸附树脂为1300、D101或AB-8型大孔吸附树脂。