[发明专利]副溶血弧菌恒温基因扩增快速检测试剂盒及使用方法

摘要

本发明公开了一种副溶血弧菌恒温基因扩增快速检测试剂盒及使用方法，试剂盒包括引物混合液，其序列为外引物1：CGCACCAGCTACTCGAAAG；外引物2：CGGCGAAGAACGTAATGTCT；内引物1：cy3－CCACCAGTAGCCGTCAATGGTGGVGACCGATTGGGAATGG；内引物2：ACACCAACACGTCGCAAACGTGCGTTCTCGTTCGCCAAAT；Bst DNA聚合酶、蛋白酶K、RNA酶、溶菌酶溶液、LAMP反应缓冲液、磷酸缓冲液、通透性处理试剂、乙醇溶液、复染剂、阳性对照。利用该试剂盒通过副溶血弧菌菌体固定处理、细胞通透性处理、恒温基因扩增反应、判断反应产物结果实现对副溶血弧菌高特异性、快速、高效、高灵敏度、简便的原位检测。

主权项

1、一种副溶血弧菌恒温基因扩增快速检测试剂盒，其特征在于，其试剂包括：①引物混合液：混合液中四条引物浓度均为10pmol/μl，，引物序列如下：外引物1：CGCACCAGCTACTCGAAAG；外引物2：CGGCGAAGAACGTAATGTCT；内引物1：cy3-CCACCAGTAGCCGTCAATGGTGGVGACCGATTGGGAATGG；内引物2：ACACCAACACGTCGCAAAACGTGCGTTCTCGTTCGCCAAAT；②Bst DNA聚合酶：浓度为8U/μl；③蛋白酶K：浓度为0.1-0.2μg/ml；④RNA酶：浓度为0.4-0.6mg/ml；⑤溶菌酶溶液：浓度为0.2-0.4mg/ml；⑥样品预处理液：pH 7.0-9.0、100mM Tris-HCl，50mM EDTA；⑦LAMP反应缓冲液：10mM dNTP∶10×ThermoPol反应缓冲液∶150mM MgSO4∶5mMBetina＝8∶5∶2∶10体积；⑧磷酸缓冲液；⑨通透性处理试剂1：为3-5％质量的多聚甲醛；⑩通透性处理试剂2：为0.02-0.04％质量的多聚赖氨酸；系列浓度乙醇溶液：为30-60％体积乙醇、60-80％体积乙醇、80-100％体积乙醇；复染剂：荧光染料1-2mg/ml DAPI；阳性对照副溶血弧菌基因组DNA。