[发明专利]玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法

摘要

本发明公开了一种玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法，包括制亲和层析柱装置、取血清0.2ml加洗脱液0.8ml上层析柱，收集25管液体进行A₂₈₀吸光值及AFP浓度测定等步骤。本发明利用AFP异质体对LCA的亲和力建立了检测AFP－L3的方法。该方法的优点是层析柱可反复再生使用，所用仪器简便、重复性满意，同时批量检测样本较多，适合基层单位的临床应用。

主权项

1、一种玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法，其特征是：依次包括下列步骤：(1)制亲和层析柱装置，玻璃微柱0.7cm×15cm；(2)使用洗脱液清洗柱子的每个角落除去气泡，关闭柱子出口并且留下1～2cm的缓冲液在柱子中，将LCA-Sepharose 4B从4℃冰箱中取出平衡至室温，然后沿柱壁向层析柱中加入，用10倍于柱体积的洗脱液平衡，关闭出口；(3)取血清0.2ml加洗脱液0.8ml上层析柱，洗脱液洗脱，滴速约8～12/min，每次收集1ml，共收集15管至A280＜0.02，随后以解吸液洗脱，方法同前，共收集10管，至A280＜0.02，收集完毕用洗脱液清洗并平衡层析柱，用同样的方式分离第二个标本，每个标本共收集25管；(4)收集25管液体进行A280吸光值及AFP浓度测定，以标准品浓度为横坐标，结合率为纵坐标制作标准曲线，根据样品的结合率在标准曲线上查出样本的AFP浓度，解吸液收集的即为AFP-L3，AFP-L3/总AFP即为AFP-L3％；所述洗脱液：pH7.4 20mmol/L Tris-HCl，含0.5mol/L NaCl，Mg2+、Ca2+，0.1％ TritonX-100；所述解吸液：含0.3mol/L α-甲基-D-甘露糖苷的洗脱液。