[发明专利]玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法

权利要求书

1、一种玻璃微柱亲和层析测定肝癌特异性AFP的方法，其特征 是：依次包括下列步骤：

(1)制亲和层析柱装置，玻璃微柱0.7cm×15cm；

(2)使用洗脱液清洗柱子的每个角落除去气泡，关闭柱子出 口并且留下1～2cm的缓冲液在柱子中，将LCA-Sepharose 4B从4℃冰 箱中取出平衡至室温，然后沿柱壁向层析柱中加入，用10倍于柱体积 的洗脱液平衡，关闭出口；

(3)取血清0.2ml加洗脱液0.8ml上层析柱，洗脱液洗脱，滴 速约8～12/min，每次收集1ml，共收集15管至A₂₈₀＜0.02，随后以解 吸液洗脱，方法同前，共收集10管，至A₂₈₀＜0.02，收集完毕用洗脱 液清洗并平衡层析柱，用同样的方式分离第二个标本，每个标本共收 集25管；

(4)收集25管液体进行A₂₈₀吸光值及AFP浓度测定，以标准品 浓度为横坐标，结合率为纵坐标制作标准曲线，根据样品的结合率在 标准曲线上查出样本的AFP浓度，解吸液收集的即为AFP-L3，AFP-L3/ 总AFP即为AFP-L3％；

所述洗脱液：pH7.4 20mmol/L Tris-HCl，含0.5mol/L NaCl， Mg²⁺、Ca²⁺，0.1％ TritonX-100；

所述解吸液：含0.3mol/L α-甲基-D-甘露糖苷的洗脱液。