[发明专利]OPG-HSP70融合蛋白的制备方法及用途

摘要

本发明为“OPG-HSP70融合蛋白的制备方法及用途”，属生物医药新技术领域。本发明提供了一种骨保护素-热休克蛋白70(OPG-HSP70)融合蛋白药物。该药物针对类风湿性关节炎(RA)最重要的病理学特征关节滑膜炎伴有软骨和骨的破坏，通过骨保护素(OPG)作为诱饵受体，可与成骨细胞等细胞表达的核因子κB受体活化因子配体(RANKL)结合，阻断RANKL与破骨细胞表达的RANK结合，从而抑制破骨细胞参与的骨吸收；利用热休克蛋白(HSP)的保护性多肽片段抑制关节炎症。发明包括编码该融合蛋白的DNA序列；经重组技术产生这种融合蛋白的方法；以及该融合蛋白的生物学活性等。

主权项

1. 一种产生OPG-HSP70融合蛋白的方法，其特征在于，该方法包括：(a)将编码OPG、其变体或片段的核苷酸序列和编码HSP蛋白、其变体或片段的核苷酸序列可操作地连接于表达载体，得到OPG-HSP70融合蛋白重组表达载体；(b)将步骤(a)中的重组表达载体转化入大肠杆菌，筛选获得表达OPG-HSP70融合蛋白的工程菌；(c)在合适的条件下发酵培养诱导表达融合蛋白；(d)从步骤(c)中的培养产物中纯化分离所述融合蛋白；其中所述融合蛋白的形式为R1-L-R2形式，其中R1为OPG蛋白、或其变体或片段，R2为HSP蛋白、或其变体或片段，L为接头蛋白。所述OPG蛋白，或其变体、片段选自：(1)SEQID No：1所示的蛋白序列；(2)氨基酸序列22-X，其中X为SEQIDNo：1所示的包括位置185—401的任意氨基酸残基。所述的HSP70蛋白、或其变体或片段选自：(1)SEQIDNo：2所示的氨基酸序列；(2)氨基酸序列ITDAVITTPAYFNDA。所述L接头选自：(1)ala-(ala)n-ala，n可以是1～4间的整数；(2)gly-(gly)n-gly，n可以是1～4间的整数；(3)gly-pro-gly；(4)gly-gly-pro-gly-gly；(5)ser-gly-(gly)n-gly，n可以是1～4间的整数；(6)val；(7)tyr-val；(8)亚部分(1)-(7)的任何组合。