[发明专利]OPG-HSP70融合蛋白的制备方法及用途

权利要求书

1.一种产生OPG-HSP70融合蛋白的方法，其特征在于，该方法包括：

(a)将编码OPG蛋白的核苷酸序列、L接头蛋白的核苷酸序列和编码HSP蛋白的核苷酸 序列可操作地连接于表达载体，得到OPG-HSP70融合蛋白重组表达载体；

(b)将步骤(a)中的重组表达载体转化入大肠杆菌，筛选获得表达OPG-HSP70融合蛋白的 工程菌；

(c)在合适的条件下发酵培养诱导表达融合蛋白；

(d)从步骤(c)中的培养产物中纯化分离所述融合蛋白；其中所述融合蛋白的形式为 R1-L-R2形式，其中R1为OPG蛋白，R2为HSP蛋白，L为接头蛋白；

所述OPG蛋白为SEQID No：1所示的第22-194位氨基酸所组成的多肽；

所述的HSP70蛋白的氨基酸序列为ITDAVITTPAYFNDA；

所述L接头选自：

(1)ala-(ala)n-ala，n是1～4间的整数；

(2)gly-(gly)n-gly，n是1～4间的整数；

(3)gly-pro-gly；

(4)gly-gly-pro-gly-gly；

(5)ser-gly-(gly)n-gly，n是1～4间的整数；

(6)val；

(7)tyr-val；

(8)亚部分(1)-(7)的任何组合。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)包括重组克隆质粒转化大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞，挑选单菌落接种于5mL含25mg/L卡那霉素的2×YT培养基，37℃ 振荡过夜；次日1∶50转接后，37℃培养2h，加入IPTG使之终浓度为0.1mmol/L，30℃继 续振荡培养5h后离心收集菌体。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(d)包括采用包涵体的溶解，稀释 复性及分子筛层析获得目的蛋白。

4.权利要求1-3任一项所述方法产生的融合蛋白在制备用于治疗类风湿关节炎的药物中 的应用。