[发明专利]一种检测牛乳中沙门氏菌的方法

摘要

一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，它涉及一种检测牛乳中细菌的方法。它解决了传统的沙门氏菌检验方法存在繁琐、费时费力、特异性低的缺陷及现有的PCR技术或LAMP技术必需预增菌，无法快速检测牛乳的问题。检测方法：一、牛乳脱脂；二、加入EDTA溶液水浴；三、过滤；四、提取样品DNA；五、LAMP扩增；六、鉴定。本发明方法简单、省时，检测操作仅需约3小时，大大的提高了被检牛乳产品的新鲜度和货架期；而且本发明方法不需要预增菌，具有快速灵敏的优点。本发明方法利用沙门氏菌特异性引物，采用优化的LAMP反应系统，成功地以沙门氏菌invA基因为靶基因进行扩增，特异性强，准确率高达99.6％。

主权项

1.一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于检测牛乳中沙门氏菌的方法按以下步骤进行：一、被检测牛乳脱脂；二、按脱脂牛乳与EDTA溶液6～8∶1的体积比向脱脂牛乳中加入质量浓度为40％～60％的EDTA溶液，然后在37±1℃条件下水浴40～50min；三、过滤：无菌操作；四、用生理盐水洗脱过滤膜上的细菌，然后离心洗脱液，再弃去上清液，并用1mL TE溶液重新悬浮沉淀物，之后再次离心、弃去上清液，用细菌基因组DNA提取试剂盒快速提取被检测样品DNA；五、LAMP扩增：25μL扩增体系由2.5μL 10×ThermoPolBuffer、1μL浓度为1.4mM的dNTP、1.6μL浓度为25μM的FIP引物、1.6μL浓度为25μM的BIP引物、0.8μL浓度为25μM的F3引物、0.8μL浓度为25μM的B3引物、0.4μL浓度为25μM的Loop f引物、0.4μL浓度为25μM的loopb引物、5μL样品DNA、0.5μL Bst聚合酶和10.4μL灭菌超纯水组成，扩增条件为65℃扩增60min；六、鉴定：取LAMP扩增产物5μL，点样于质量浓度为2％的琼脂糖凝胶，再以100V电压在1×TAE电泳缓冲液中电泳45min，然后在凝胶成像系统中成像；其中步骤六使用的琼脂糖凝胶中含有0.25μg/mL的溴化乙啶。