[发明专利]一种检测牛乳中沙门氏菌的方法

权利要求书

1.一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于检测牛乳中沙门氏菌的方法按以下步骤进行：一、被检测牛乳脱脂；二、按脱脂牛乳与EDTA溶液6～8∶1的体积比向脱脂牛乳中加入质量浓度为40％～60％的EDTA溶液，然后在37±1℃条件下水浴40～50min；三、过滤：无菌操作；四、用生理盐水洗脱过滤膜上的细菌，然后离心洗脱液，再弃去上清液，并用1mL TE溶液重新悬浮沉淀物，之后再次离心、弃去上清液，用细菌基因组DNA提取试剂盒快速提取被检测样品DNA；五、LAMP扩增：25μL扩增体系由2.5μL 10×ThermoPolBuffer、1μL浓度为1.4mM的dNTP、1.6μL浓度为25μM的FIP引物、1.6μL浓度为25μM的BIP引物、0.8μL浓度为25μM的F3引物、0.8μL浓度为25μM的B3引物、0.4μL浓度为25μM的Loop f引物、0.4μL浓度为25μM的loopb引物、5μL样品DNA、0.5μL Bst聚合酶和10.4μL灭菌超纯水组成，扩增条件为65℃扩增60min；六、鉴定：取LAMP扩增产物5μL，点样于质量浓度为2％的琼脂糖凝胶，再以100V电压在1×TAE电泳缓冲液中电泳45min，然后在凝胶成像系统中成像；其中步骤六使用的琼脂糖凝胶中含有0.25μg/mL的溴化乙啶。

2.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤一被检测牛乳在2800～3200g的条件下离心10～20min，然后真空抽取上层脂肪进行脱脂。

3.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤二中按脱脂牛乳与EDTA溶液7∶1的体积比加入质量浓度为50％的EDTA溶液。

4.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤二中在37℃条件下水浴45min。

5.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤三中采用真空抽滤。

6.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤三中过滤膜的孔径为0.22μm。

7.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤四中洗脱液在10000g的条件下离心5min。

8.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤四中用20mL生理盐水洗脱过滤膜上的细菌。

9.根据权利要求1所述的一种检测牛乳中沙门氏菌的方法，其特征在于步骤五中loop f引物的序列为CGGCCTTCAAATCGGCATCAATAC；loop b引物的序列为AAGGGAAAGCCAGCTTTACG；FIP引物的序列为GCGCGGCATCCGCATCAAIAATGGTATGCCCGGTAAACAG；BIP引物的序列为GAACGGCGAAGCTTACTGGACATCGCACCGTCAAAGGA；F3引物的序列为CGGCCCGATTTTCTCTGG；B3引物的序列为GATGCCGGCAATAGCGTC。