[发明专利]利用研磨法从凝胶中纯化小片段DNA的方法和用途

摘要

本发明公开了一种利用匀浆器研磨凝胶快速高效纯化回收小片段DNA的方法。将包含目的小片段DNA的凝胶在TE缓冲液中直接用匀浆器研磨后，离心收集上清，在盐离子和无水乙醇的作用下沉淀DNA，再将沉淀的DNA重溶于TE缓冲液中，从而实现小片段DNA的高效纯化回收。该方法操作步骤简单，提高了回收效率。该方法同时为基因克隆、突变检测、基因诊断和治疗等研究和应用中小分子量DNA的纯化回收提供了一种新的手段。

主权项

1.一种利用研磨法从凝胶中纯化小片段DNA的方法，其特征在于包括如下步骤：1)在回收包含PCR或酶切产生的小分子量DNA片段的高浓度凝胶中，加入400～800μl 0.1倍TE缓冲液或灭菌水，用匀浆器研磨破碎，10000～12000rpm离心5～10分钟，取上清；2)在上清液中加入1/3体积pH为5.2的3M NaAc和2倍体积的无水乙醇，或者0.6倍体积的异丙醇，以沉淀DNA；10000～12000rpm离心5～10分钟，弃上清；3)用600～1000μl 70％的冷乙醇洗涤DNA沉淀，10000～12000rpm离心3～5分钟，弃上清；4)真空抽干DNA沉淀，让残留的乙醇挥发干净，将DNA沉淀溶解在0.1倍TE缓冲液或灭菌水中，-20℃保存。