[发明专利]一种基于微流控芯片的单细胞内涵物分析方法

摘要

本发明提供了一种基于微流控芯片的简单、快速、高通量地单细胞内涵物分析方法：即十字型PDMS芯片，经过环氧聚合物涂层处理完全后抑制了通道表面电渗流，细胞在静压力作用下进样，在十字交叉口受到电场力作用偏转入分离通道，然后在背景缓冲液中SDS作用下在0.5s内快速裂解，释放出的内涵物经电泳分离，激光诱导荧光检测。相对于现有技术而言，本发明具有简单、快速和通量高的优点，可以从细胞水平上研究生命活动的本质，有检测活性周期较短的不稳定中间产物的可能性，了解生命活动的本质，为疾病早期诊断和生命科学提供更好和更多的有用信息。

主权项

1、一种基于微流控芯片的单细胞内涵物分析方法，其特征在于：使用专用的微流控芯片分析单细胞内涵物；所述的微流控芯片为十字型PDMS芯片，由细胞池、空池、缓冲池、废液池构成；方法过程为：将十字型PDMS芯片放入等离子体中进行等离子化处理，然后快速取出不可逆封接，加入环氧聚合物涂层液，室温静置10～30分钟，抽干后放入80～120℃烘箱10～30分钟，然后水洗保存备用；将细胞预标记上染料，与荧光染料孵育10～60分钟，然后用磷酸缓冲液PBS清洗两次，重新悬浮于PBS中，使细胞液的浓度控制在1×106～5×106cells/mL范围内，使单个细胞连续进样；将细胞悬浮液加入到细胞池中，在缓冲液池和废液池中加入等量的0.1％～0.4％十二烷基磺酸钠SDS的硼酸缓冲液，空池中不加缓冲液；细胞悬浮液在静压力作用下从细胞池流向空池，在十字交叉口处受到水平方向电场力的作用偏转入分离通道；细胞在分离通道中在SDS作用下快速裂解，释放出内涵物，内涵物经电泳分离并采用激光焦斑检测，从而实现了对细胞内涵物的分析。