[发明专利]具有高度延伸专一性的DNA低温循环延伸反应方法无效
| 申请号： | 01117603.2 | 申请日： | 2001-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN1384203A | 公开（公告）日： | 2002-12-11 |
| 发明（设计）人： | 洪国藩;杨永杰;朱嘉 | 申请（专利权）人： | 香港科技创业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 香港中环干诺道中*** | 国省代码： | 香港;81 |
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| 摘要： | 本发明提供一种具有高度延伸专一性的DNA低温循环延伸反应的方法,该方法采用低温DNA扩增体系,使用短于25bp的引物得到有用的特异性产物,供测序或其他分析之需,本发明可用于大规模高保真PCR和自动荧光DNA循环测序反应。 | ||
| 搜索关键词： | 具有 高度 延伸 专一性 dna 低温 循环 反应 方法 | ||
【主权项】：
1.一种延伸专一性的DNA低温循环延伸方法包括a.在反应体系中含有低浓度的甘油或乙二醇，存在有一种模板，一对长度短于或长于25bp的引物和一种野生型或修饰后的中等热稳定DNA聚合酶的即用型反应混合物，当温度在变性温度(~70℃)和退火温度(约37℃)之间循环时DNA聚合酶能重复延伸引物，得到序列特异性扩增产物；b.扩增双链DNA片断直接用于循环测序反应，该循环测序反应包括加入大大过量引物、四种标准荧光标记的ddNTP终止物、一种中等热稳定的DNA聚合酶、适量四种ddNTP混合物及含有15％(V/V)甘油的缓冲体系，在80℃以下重复环引物延伸反应若干次，得荧光标记ddNTP终止的不同长度延伸产物。
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