[发明专利]仔猪大肠杆菌K88ac－ST1－LTB三价基因工程菌苗及制备方法

摘要

仔猪大肠杆菌K88ac－ST1－LTB三价基因工程菌苗及制备方法,其特征是采用聚合酶链反应和基因突变技术,从大肠杆菌C83902质粒中扩增出K88ac、ST1和LTB基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含K88ac－ST1－LTB融合基因表达载体的基因工程菌株BL21(DE3)(pXKST3LT5),该菌株表达的有效抗原成份在菌体内部,能达到缓慢连续释放的作用,且解决了ST1的抗原性难题,克服了目前市场上使用的大肠杆菌菌苗的缺点,从而达到更有效地预防由产肠毒素性大肠杆菌引起的仔猪黄、白痢的目的。

主权项

1.一种用于预防仔猪大肠杆菌腹泻的K88ac-ST1-LTB三价基因工程菌苗，其特征是基因工程菌株BL21(DE3)(pXKST3LT5)：1)受体菌为大肠杆菌BL21(DE3)2)重组表达质粒pXKST3LT5-Ori--PT7--K88acgene--ST1-ST1-ST1gene--LTBgene--Kangene--它含有大肠杆菌复制子Ori，PT7是T7RNA聚合酶/启动子表达系统，受体菌BL21(DE3)，外源目的基因为K88ac、ST1和LTB基因，抗性筛选基因为卡那霉素Kan基因；K88ac保护性抗原基因是K88ac全基因的第250位至第579位，该基因表达的抗原包含了K88ac全抗原的绝大部分抗原决定簇；ST1基因为3｀端含有2个编码半胱氨酸残基Cys的TGT被突变成编码丝氨酸残基Ser的AGT的突变基因，串联在一起的3个ST1突变基因所表达的ST1突变肠毒素已失去了ST1肠毒素本身的生物学毒性；LTB抗原基因为具有良好的抗原性的全基因，基因工程菌株BL21(DE3)(pXKST3LT5)表达的有效抗原K88ac-ST1-LTB融合蛋白以包含体形式存在于菌体内部，且K88ac和LTB在保留原有抗原性基础上，赋予了原本不具有抗原性的ST1具有了抗原性。