[发明专利]一种新的提取纯化羊胎素工艺和检测其生物活性的方法

摘要

本发明公开了一种新的提取纯化羊胎素工艺和检测其生物活性的方法,采用现代生物技术提取纯化羊胎盘蛋白组份,主要包括采用匀浆、盐沉淀(硫酸胺盐或氯化钠盐)、低温离心、低温超滤、葡聚糖层析、核酸蛋白检测和氨基酸组成分析等步骤,用该方法所获得的羊胎素具有纯度高、匀一性好、生物活性强和得率多、成本低等优点,有极大的实用价值。

主权项

1、一种新的提取纯化羊胎素工艺，其特征在于，包括：抽提和盐析、超滤和脱盐、透析和浓缩、以及羧甲基纤维素葡聚糖凝胶阳离子交换层析四个步骤；所述的抽提和盐析的步骤包括：将新鲜或冷冻的羊胎剪除胎膜和大血管，洗净残余的血块，切碎，再在组织捣碎机中反复捣碎，制成匀浆；将该匀浆在冰浴中搅拌，弃沉淀，取上清液再搅拌，盐析沉淀，即得到含有羊胎素的粗提物；所述的超滤和脱盐的步骤包括：先在截留值为30000千道尔顿～4000道尔顿的过滤机中初滤，再在摄氏0-15度的低温条件下采用截留值为100道尔顿～800道尔顿的超滤器进行分级超滤和脱盐；所述的透析和浓缩的步骤包括：将粗提物用少量冷去离子水溶解后，再彻底透析；收集透析液并浓缩，计算总体积，测定蛋白质浓度；所述的羧甲基纤维素葡聚糖凝胶阳离子交换层析步骤包括：将羊胎素粗提物浓缩液透析，然后上样于预先用同样缓冲液平衡过的羧甲基纤维素葡聚糖凝胶阳离子交换层析柱进行洗脱，得到第一个蛋白峰；待该蛋白峰下降至基线位置时，再递次用上述磷酸盐缓冲液洗脱，分别可得到第二个蛋白峰和第三个蛋白峰；分别收集上述CMF1、CMF2和CMF3组份，分别命名为羊胎素1，羊胎素2和羊胎素3待测其蛋白质浓度和生物活性。