[发明专利]采用还原剂的改进型免疫诊断分析

权利要求书

1．在还原剂存在的情况下，在所述固相上包含抗原的固相免疫检测法。

2．产生或进行按照权利要求1的免疫检测的方法，其中在将所述抗原包被、封闭和/或固定到所述固相的步骤期间或在所述固相的预处理期间，将所述还原剂加入到所述固相中。

3．按照权利要求2的方法，其中在包被所述抗原到固相的步骤期间，将所述还原剂加入到所述固相中。

4．按照权利要求2的方法，其中在封闭所述固相的步骤期间，将所述还原剂加入到所述固相中，其中所述固相含有在存在或不存在还原剂的情况下加于其上的所述抗原。

5．按照权利要求2的方法，其中在固定所述固相的步骤期间，将所述还原剂加入到所述固相中，其中所述固相在存在或不存在还原剂的情况下含有加于其上的所述抗原。

6．按照权利要求2的方法，其中在所述固相的预处理期间加入所述还原剂，其中所述固相含有在存在或不存在还原剂的情况下加于其上的所述抗原。

7．按照权利要求1-6的任一项的方法，其中所述还原剂是DTT、DTE或TCEP。

8．按照权利要求1-7的任一项的方法，其中所述还原剂是以0.1mM-1M的浓度范围使用，更具体为0.5mM-500mM，甚至更具体地为1mM-250mM浓度范围，某些应用可需要0.5-50mM、1-30mM、2-20mM、或5-15mM或大约10mM的浓度范围。

9．按照权利要求2-8的任一项的方法，其中所述抗原是HCV NS3蛋白。

10．通过按照权利要求2-9的任一项的方法产生的固相免疫检测法。

11．通过按照权利要求2-9的任一项的方法产生的ELISA。

12．按照权利要求11的ELISA，其中在所述包被和/或固定步骤中加入所述还原剂。

13．通过按照权利要求2-9的任一项的方法产生的QUICK测试方法。

14．按照权利要求13的QUICK测试方法，其中在所述封闭步骤中加入所述还原剂。

15．通过按照权利要求2-9的任一项的方法产生的线性免疫测定法。

16．按照权利要求15的线性免疫测定法，其中在所述封闭步骤中加入所述还原剂。

17．如权利要求1中所述，按照权利要求10-16的检测法用于针对抗原产生的抗体的体外诊断的用途。

18．通过包含磺化作用和随后的脱磺酸基作用步骤的方法处理的HCV NS3蛋白。

19．用兼性离子去污剂、优选Empigen另外处理的按照权利要求18的HCV NS3蛋白。

20．纯化含有半胱氨酸的重组表达蛋白的方法，该方法包括至少2个、优选3或4个、甚至更优选所有以下步骤：

(a)磺化重组宿主细胞的溶胞产物，或在氯化胍存在的情况下溶胞重组宿主细胞及随后磺化所述细胞溶胞产物，

(b)用兼性离子去污剂处理，优选在去除细胞碎片之后，

(c)纯化磺化型所述重组蛋白，或纯化磺化型所述重组蛋白并随后去除所述兼性离子去污剂，所述纯化优选层析、更优选Ni-IMAC层析，而所述重组蛋白为His-标记的重组蛋白，

(d)对磺化型所述重组蛋白进行脱磺酸基作用，优选用多于一摩尔的DTT，

(e)在多于一摩尔的DTT存在的情况下储藏，或在检测中立即使用。

21．编码如图1(SEQ ID NO 3-18)所示的多肽的HCV多核酸，或HCV多核酸的独特部分，更具体地说是具有如图2-1、3-1、4-1、5-1、6-1、7-1或8-1(SEQ ID NO 19、21、23、25、27、29和31)所代表的序列的多核酸。

22．按照权利要求21的如图2-1、3-1、4-1、5-1、6-1、7-1或8-1所示的HCV多核酸，并且其特征在于其产物不与假阳性HCV样品反应这一事实，或者其编码不与假阳性HCV样品反应的NS3表位的一部分。

23．包含按照权利要求21或22的多核酸的重组载体。