[发明专利]适合生产蛋白质的表达系统

权利要求书

1、一种适合在丝状真菌内生产蛋白质的表达系统，包括

a)一由栓菌或多孔菌属中选出的宿主生物；

b)一含有选择标志基因的DNA载体，该基因编码一蛋白质，该蛋白质，于宿主生物转化后，允许选择阳性转化株，该基因选自下述一组：抗生素抗性的基因，其编码破坏抗生素的生长抑制作用的蛋白质，宿主生物无抗生素抗性；编码具有生色反应能力的蛋白质的基因；及互补宿主生物内(营养缺陷型)基因缺陷的基因；而选择标志基因的表达受至少一种在宿主生物中活化的基因调节元件控制；及

c)一含有编码待生产的蛋白质的基因的DNA载体，而此基因的表达及，如适当，以此方式所生产的蛋白质的分泌，系受一在宿主生物中活化的基因调节元件控制，

其中含有选择标志基因的DNA载体，及含有编码待生产的蛋白质的基因的DNA载体，亦可以一个DNA载体形式存在。

2、根据权利要求1所述的表达系统，其中宿主生物为栓菌或多孔菌属的单核细胞菌株。

3、根据权利要求1或2所述的表达系统，其中宿主生物为变色栓菌。

4、根据权利要求1至3任一所述的表达系统，其中宿主生物具有乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶基因(pyr G基因)缺陷且是尿嘧啶核苷营养缺陷型，且选择标志基因为pyr G基因。

5、根据权利要求1至4任一项所述的表达系统，其中在宿主生物中活化的基因调节元件，系选自甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH基因)的启动子元件，如适当，及终止子元件，以及漆酶基因的启动子及终止子元件。

6、根据权利要求1至5任一项所述的表达系统，其中待表达的蛋白质为漆酶。

7、一种含有至少一种选择标志基因的DNA载体，该选择标志具有编码一蛋白质，该蛋白质于转化选自栓菌及多孔菌属的宿主生物后，允许选择阳性转化株，其中该选择标志基因由下述一组中选出：抗生素抗性的基因，其编码破坏抗生素的生长抑制作用的蛋白质，宿主生物无抗生素抗性；编码具有生色反应能力的蛋白质的基因；及互补宿主生物内(营养缺陷型)基因缺陷的基因；而选择标志基因的表达受至少一种在宿主生物中活化的基因调节元件控制。

8、一种在栓菌及多孔菌中活化的调节元件，包括SEQ ID NO:1内碱基1-1192的序列段，或SEQ ID NO:2内碱基1-547的序列段，基片SEQ ID NO:3内碱基1365-1542的序列段，及与此序列段同源并同源性大于73％的序列段。

9、一种适合生产能有效表达与分泌蛋白质的真菌菌株的方法，包括用一由栓菌及多孔菌属中选出的真菌作为宿主菌株，该宿主菌具有尿嘧啶核苷营养缺陷型基因缺陷，并依习知的方法，用一种DNA载体转化，该DNA载体具有一基因，其能互补宿主菌株中的营养缺陷型基因缺陷；以及从转化混合物选择用DNA载体转化的克隆，所述选择通过选择对营养缺陷型基因缺陷的互补而进行，其中用于互补宿主菌株内营养缺陷型基因缺陷的基因的表达由一在宿主菌株内活化的基因调节元件控制。

10、一种生产蛋白质的方法，包括用如权利要求1至6一或多项所述的表达系统，以习知方式生产蛋白质，或包括依习知方式培养如权利要求9所述的真菌菌株。