[发明专利]在酵母中制备目的多肽的方法

权利要求书

1．通过于合适培养基中培养含有能表达下式序列的表达载体的酵母株，在酵母中制备目的多肽的方法，

      SP-LP-Xn-PS-^*多肽^*其中

SP是信号肽；

LP是天然α-因子前导肽或与其至少85％同源的前导肽；

PS是单碱性氨基酸加工位点Lys或Arg；

X是含n个氨基酸的间隔肽；

n是0或1-10的整数；并且

“多肽”是目的多肽；

条件是间隔肽X不是Ile-Glu-Gly、Leu-Pro、Lys-Lys-Leu-Ile-Asp、Ile-Asp或Pro-Gly-Asp-Pro，进一步的条件是间隔肽X不含KEX2切割位点，并且不与PS或LP一起构成KEX2切割位点，且当n=0时，前导肽C-末端不是Lys、Arg、Ile-Glu-G1y、Leu-Pro、Lys-Lys-Leu-Ile-Asp、Ile-Asp或Pro-Gly-Asp-Pro，从而前导序列结合的目的多肽在体内穿越细胞膜期间或分泌至培养基中后于体外在加工位点PS处被切割，由此分离目的多肽。

2．按照权利要求1的方法，其中SP是与酵母同源的信号肽。

3．按照权利要求2的方法，其中SP是α-因子信号肽、酵母天冬氨酸蛋白酶3信号肽、小鼠唾液淀粉酶信号肽、羧肽酶信号肽或酵母BARl信号肽。

4．按照权利要求1的方法，其中PS是Lys。

5．按照权利要求1的方法，其中X是Lys-Glu-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala或Lys-Glu。

6．按照权利要求1的方法，其中n是从1至3的整数。

7．按照权利要求1的方法，其中n=0。

8．按照权利要求1的方法，其中酵母株包括编码特异于单碱性氨基酸加工位点的蛋白酶的DNA序列，所说的蛋白酶与前导序列结合多肽共表达并在加工位点PS处切割前导序列结合多肽。

9．按照权利要求8的方法，其中共表达的蛋白酶是胰蛋白酶、水解无色杆菌蛋白酶Ⅰ、肠激酶、尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶或YAP3。

10．按照权利要求9的方法，其中所述蛋白酶是YAP3或其类似物，诸如YAP3_△18。